脂肪因子visfatin在妊娠期糖尿病發(fā)病中的作用.pdf

1、妊娠期糖尿病(gestational diabetes mellitus,GDM)是孕期常見的并發(fā)癥之一,其臨床經(jīng)過復(fù)雜,嚴(yán)重威脅母兒安全。GDM的發(fā)病機(jī)制尚不清,經(jīng)典的觀點(diǎn)認(rèn)為孕期胎盤泌乳素、催乳素、孕激素及糖皮質(zhì)激素等拮抗胰島素激素水平的升高及其造成的胰島素抵抗?fàn)顟B(tài)是GDM發(fā)病過程中的重要環(huán)節(jié)。但難以解釋的是,在妊娠期婦女普遍存在生理性胰島素抵抗的情況下為何GDM孕婦發(fā)病。近年來研究發(fā)現(xiàn)一些炎癥因子、脂肪因子的改變在妊娠期胰島素抵抗

2、中起重要作用,這為我們進(jìn)一步探索GDM的發(fā)病機(jī)制提供了新的思路。2005年,日本學(xué)者用差異顯示法發(fā)現(xiàn)了一個在內(nèi)臟脂肪組織特異性高表達(dá)的脂肪因子,命名為內(nèi)脂素(visfatin)?；谄漕愐葝u素、炎癥因子、輔酶1(NAD)合成等多種生物學(xué)作用,visfatin成為NAD生物學(xué)、代謝、炎癥等眾多領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。GDM患者存在復(fù)雜的代謝和炎癥等改變,但目前對于visfatin與GDM的關(guān)系了解甚少。本研究中,首先檢測了正常妊娠孕婦和GDM孕婦

3、血清visfatin表達(dá)水平的差異,了解血清visfatin的改變與GDM的相關(guān)性。在此基礎(chǔ)上,研究了visfatin在正常妊娠孕婦及GDM孕婦皮下脂肪組織、內(nèi)臟脂肪組織及胎盤組織中表達(dá)的改變,分析血清visfatin的主要來源,并進(jìn)一步用離體細(xì)胞實驗觀察了visfatin表達(dá)的調(diào)控,旨在探討visfatin在GDM發(fā)病中的作用。
　　第一部分正常妊娠孕婦和妊娠期糖尿病孕婦血清visfatin的表達(dá)
　　目的：了解正常妊娠孕

4、婦與GDM孕婦血清visfatin表達(dá)水平的差異,探討其與GDM的相關(guān)性。
　　方法：選擇2008年12月~2009年3月在復(fù)旦大學(xué)附屬婦產(chǎn)科醫(yī)院產(chǎn)科門診行常規(guī)產(chǎn)前檢查并足月入院行擇期剖宮產(chǎn)的孕婦。其中正常對照組22例,GDM組20例。檢測人體測量參數(shù)和生化指標(biāo)。采用ELISA方法檢測兩組產(chǎn)前及產(chǎn)后3日血清及臍血visfatin的含量。用最小穩(wěn)態(tài)模型計算胰島素抵抗指數(shù)(HOMA-IR)：空腹血糖(FPG)×空腹胰島素(FINS)/

5、22.5。比較兩組的檢測結(jié)果。
　　結(jié)果：1)GDM組餐后一小時血糖(1hPG)、FINS、HOMA_IR、腫瘤壞死因子-a(TNF-a)水平顯著高于正常對照組,存在明顯的胰島素抵抗。2)與正常對照組相比,GDM孕婦血清visfatin水平顯著升高([7.9±a2.0]vs.[6.2±1.4]ng/ml,p=0.004),產(chǎn)后3日GDM孕婦血清visfatin水平較產(chǎn)前明顯下降([7.9±2.0]vs.[6.3±1.7]ng/ml

6、,p=0.025)。正常對照組孕婦產(chǎn)后血清visfatin水平呈下降趨勢,但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(p>0.05)。正常對照組和GDM組胎兒臍血visfatin水平無顯著性差異(p>0.05)。臍血visfatin水平與新生兒出生體重呈顯著正相關(guān)(r=0.513,p=0.001)。3)研究對象總體中visfatin與1hPG呈顯著正相關(guān)(r=0.432,p=0.004)。多因素Logistic逐步回歸分析結(jié)果顯示校正1hPG后visfatin

7、(B=0.827,p=0.011,OR=2.287,95％CI1.213~4.311)、FINS(B=0.416,p=0.031,OR=I.517,95％CI1.039~2.213)是GDM的獨(dú)立影響因素。
　　結(jié)論：GDM孕婦血清visfatin水平顯著升高,產(chǎn)后短期內(nèi)較產(chǎn)前明顯下降,血清visfatin水平是GDM的獨(dú)立影響因素。Visfatin可能通過炎癥等非胰島素作用途徑參與GDM的發(fā)生和發(fā)展。臍血visfatin的水平可

8、以間接反映胎兒脂肪儲備情況,也許可以作為巨大兒的預(yù)測因子。
　　第二部分Visfatin在皮下脂肪組織、內(nèi)臟脂肪組織及胎盤組織中的表達(dá)
　　目的：檢測正常妊娠孕婦與GDM孕婦皮下脂肪組織、內(nèi)臟脂肪組織(大網(wǎng)膜)和胎盤組織中visfatin mRNA及蛋白表達(dá)的差異及其表達(dá)定位,以探討不同組織中visfatin的表達(dá)與GDM的關(guān)系。
　　方法：選擇上述住院手術(shù)分娩的GDM孕婦(n=20)和正常妊娠孕婦(n=22),術(shù)中收

9、集標(biāo)本。分別用免疫組化、RT-PCR和western blot測定法檢測兩組皮下脂肪組織、大網(wǎng)膜及胎盤組織中visfatin mRNA及蛋白表達(dá)的情況,比較兩組的檢測結(jié)果。
　　結(jié)果：GDM組孕婦胎盤組織visfatin的mRNA水平和蛋白水平均顯著高于正常對照組孕婦(p=0.014,p=0.006),并且與血清visfatin水平顯著正相關(guān)(r=0.512,p=0.015;r=0.819,p=0.046)。而兩組大網(wǎng)膜及皮下脂肪

10、組織visfatin的表達(dá)無明顯差異(p>0.05),脂肪組織visfatin的表達(dá)與血清visfatin水平無明顯相關(guān)性(p>0.05)。胎盤組織中visfatin的表達(dá)部位主要為合體滋養(yǎng)細(xì)胞,以胞漿表達(dá)為主。
　　結(jié)論：胎盤組織visfatin的過度表達(dá)是GDM孕婦血清visfatin水平升高的主要來源。脂肪組織visfatin的表達(dá)與GDM的關(guān)系不明顯。胎盤組織分泌的visfatin不僅參與GDM的發(fā)生和發(fā)展,還可能參與調(diào)解

11、母胎之間葡萄糖的轉(zhuǎn)運(yùn),與巨大兒等并發(fā)癥的發(fā)生有關(guān)。
　　第三部分 TNF-a對滋養(yǎng)細(xì)胞visfatin表達(dá)的調(diào)控
　　目的：GDM孕婦胎盤組織中visfatin的過度表達(dá),是導(dǎo)致血循環(huán)中visfatin水平異常增高的主要原因。本研究旨在觀察TNF-a對滋養(yǎng)細(xì)胞visfatin表達(dá)的調(diào)控,探討胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞visfatin表達(dá)的調(diào)控機(jī)制。
　　方法：運(yùn)用不同濃度的TNF-a(0.1、1、10、100ng/ml)分別作用人絨

12、癌滋養(yǎng)細(xì)胞株BeWo細(xì)胞0、24、48和72h。采用RT-PCR及western blot檢測BeWo細(xì)胞及培養(yǎng)液中visfatin轉(zhuǎn)錄水平和蛋白水平的變化。
　　結(jié)果：BeWo細(xì)胞培養(yǎng)24、48、72h后細(xì)胞及細(xì)胞外培養(yǎng)液中均有visfatin蛋白的表達(dá)。與空白對照相比,培養(yǎng)48小時后,隨著TNF-a濃度的增加,細(xì)胞外培養(yǎng)液中visfatin蛋白的表達(dá)量顯著增加,而細(xì)胞內(nèi)visfatin mRNA的含量隨著TNF-a濃度的增加明