全氟辛烷磺酸對(duì)大鼠海馬細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度的影響.pdf

1、目的： 全氟辛烷磺酸是全氟碳化物中的重要化合物之一。 毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)證實(shí)了PFOS對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物具有發(fā)育毒性、免疫毒性、生殖毒性和潛在致癌性。但目前關(guān)于PFOS材料引起的神經(jīng)毒性評(píng)價(jià)資料還很少。本研究從腦與血清中PFOS濃度與中樞神經(jīng)損傷的相關(guān)性、PFOS對(duì)中樞神經(jīng)神經(jīng)元[Ca<'2+>]i的影響等方面，探討PFOS對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)的可能影響機(jī)制，進(jìn)而為PFOS的安全性評(píng)價(jià)提供科學(xué)依據(jù)。 材料與方法： 1、動(dòng)物染毒

2、方案 (1)PFOS-飼料配制：配制2％Tween 80溶液，按照設(shè)計(jì)劑量加入全氟辛烷磺酸鉀(PFOS-K)配制PFOS溶液。霍恩法計(jì)算PFOS溶液經(jīng)消化道LD<,50>。將溶液按照設(shè)計(jì)劑量加入大鼠粉碎型飼料中，烘干待用。 (2)動(dòng)物分組及染毒：雄性Wistar大鼠50只，體重180-220g，適應(yīng)性喂養(yǎng)7天后按體重隨機(jī)分為5組，每組10只。動(dòng)物室溫度18℃-23℃，相對(duì)濕度45％-55％。實(shí)驗(yàn)組PFOS染毒劑量分別為2

3、、8、32、128 mg·kg<'-1>(feed)，對(duì)照組給予2％Tween-80處理后干飼料，實(shí)驗(yàn)組給予設(shè)計(jì)劑量的PFOS處理飼料，自由進(jìn)食水。連續(xù)染毒60天。染毒結(jié)束后，腹腔注射0.4％(w/v)戊巴比妥鈉麻醉大鼠。取腦，剝離海馬組織。取血清及剩余腦組織，-80℃冷凍保存。 2、觀察指標(biāo)與檢測(cè)方法 (1)染毒大鼠體重及絕對(duì)飼料消耗量記錄； (2)染毒大鼠超聲刺激記錄； (3)血清及腦組織樣品中PFO

4、S濃度的測(cè)定-固相萃取-高效液相色譜/質(zhì)譜聯(lián)機(jī)法(HPLC/MS-MIS)； (4)海馬細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度測(cè)定-Fura-2/AM熒光探針?lè)ǎ?(5)腦皮質(zhì)、海馬、小腦細(xì)胞病理學(xué)觀察-尼氏染色法； 3、統(tǒng)計(jì)分析 全部數(shù)據(jù)分析處理均采用SPSS(13.0)統(tǒng)計(jì)軟件。實(shí)驗(yàn)結(jié)果用x±s表示。各試驗(yàn)組與對(duì)照組數(shù)據(jù)之間比較：數(shù)據(jù)經(jīng)正態(tài)性檢驗(yàn)，符合正態(tài)分布的采用單因素方差分析，不符合的采用秩和檢驗(yàn)。 試驗(yàn)結(jié)果：

5、 1、各試驗(yàn)組染毒大鼠體重及絕對(duì)飼料消耗量在相同染毒天數(shù)內(nèi)，大鼠體重增加數(shù)量隨染毒劑量的增加而減少。染毒60天結(jié)束時(shí)，32、128 mg·kg<'-1>(feed)組大鼠體重顯著低于8 mg·kg<'-1>(feed)組(p<0.05)和對(duì)照組大鼠體重(p<0.01)。染毒前30天內(nèi)各劑量組大鼠每增加100g體重的絕對(duì)食物消耗量未出現(xiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p>0.05)，染毒結(jié)束前30天內(nèi)128mg·kg<'-1>(feed)組大鼠每增加

6、100g體重的絕對(duì)食物消耗量顯著低于對(duì)照組(p<0.01)。 2、各試驗(yàn)組大鼠超聲刺激下的驚厥記錄實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組之間無(wú)顯著性差異(p>0.05)。 3、各試驗(yàn)組血清及腦組織樣品中PFOS濃度的測(cè)定8 mg·kg<'-1>(feed)組及更高染毒組的血清和腦中PFOS濃度均顯著高于對(duì)照組(p<0.01)，并與染毒劑量之間呈現(xiàn)正相關(guān)關(guān)系(r=0.944，p<0.01)。2 mg·kg<'-1>(feed)組血清中PFOS濃度

7、顯著高于對(duì)照組(p<0.05)。PFOS 8 mg·kg<'-1>(feed)染毒組的血清和腦中PFOS濃度與2 mg·kg<'-1>(feed)染毒組水平之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p>0.05)。 4、海馬細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度PFOS 2、8、32、128 mg·kg<'-1>(feed)染毒組海馬細(xì)胞[Ca<'2+>]i分別為222.27±9.67nmol·L<'-1>、244.29±9.07 nmol·L<'-1>、381.69±9.

8、61 nmol·L<'-1>和528.27±15.51nmol·L<'-1>，與對(duì)照組[(141.30±2.70)nmol·L<'-1>]比較具有顯著性差異(P<0.01)，并且海馬細(xì)胞[Ca<'2+>]i與PFOS染毒劑量成正相關(guān)(r=0.929，p<0.05)。大鼠血清中PFOS濃度與腦中PFOS濃度(r=0.801，p<0.01)、腦中PFOS濃度與海馬細(xì)胞[Ca<'2+>]i(r=0.811，p<0.01)以及血清中PFOS濃度

9、與海馬細(xì)胞[Ca<'2+>]i(r=0.955，p<0.01)，均呈現(xiàn)顯著的正相關(guān)關(guān)系。 5、大鼠腦皮質(zhì)、海馬和小腦細(xì)胞的尼氏染色對(duì)照組大鼠大腦皮質(zhì)中外顆粒層和錐體細(xì)胞層中的錐體細(xì)胞、海馬CA1區(qū)M段錐體細(xì)胞和小腦Purkinji細(xì)胞胞漿勻質(zhì)，胞核大而圓，位于細(xì)胞中央。尼氏小體呈紫色，部分細(xì)胞核仁清晰可見(jiàn)，核突明顯。各染毒組大鼠腦切片中未見(jiàn)尼氏體斑塊染色變淺等病理性改變。 結(jié)論： 1、PFOS消化道亞慢性染毒可以