比率熒光光譜儀測(cè)量細(xì)胞內(nèi)游離鈣離子濃度的研究.pdf

1、新的熒光染料的開(kāi)發(fā)和成像技術(shù)的發(fā)展,極大的促進(jìn)了對(duì)細(xì)胞內(nèi)鈣信號(hào)傳導(dǎo)途徑的研究.該文前半部分簡(jiǎn)要回顧了Ca<'2+>熒光測(cè)量方法的歷史與發(fā)展,介紹了Ca<'2+>作為細(xì)胞內(nèi)第二信使的作用機(jī)理及對(duì)細(xì)胞內(nèi)Ca<'2+>濃度進(jìn)行熒光測(cè)量的原理并對(duì)我們的實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)做了簡(jiǎn)潔的說(shuō)明.該文后半部分主要圍繞用比率熒光光譜儀測(cè)量細(xì)胞內(nèi)游離Ca<'2+>的研究進(jìn)行了以下工作:(1)建立了比率熒光光譜儀測(cè)量細(xì)胞內(nèi)游離鈣離子濃度的實(shí)驗(yàn)系統(tǒng);(2)建立了乳鼠心肌細(xì)胞

2、原代培養(yǎng)的模型,并對(duì)培養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行了細(xì)胞內(nèi)Ca<'2+>濃度的測(cè)量.在心肌細(xì)胞外液中加入NE(去鉀腎上腺素)后測(cè)得的相對(duì)熒光強(qiáng)度明顯升高,該現(xiàn)象符合NE的生理作用特點(diǎn),因而表明我們所建立的測(cè)量細(xì)胞內(nèi)Ca<'2+>濃度動(dòng)態(tài)變化的心肌細(xì)胞實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)是可行的.(3)通過(guò)用Fura-2/AM對(duì)B16細(xì)胞內(nèi)Ca<'2+>濃度的測(cè)量,確定了B16細(xì)胞的制備及熒光染料的載入方法;建立了用隨機(jī)軟件ImageMaster獲取被測(cè)細(xì)胞的圖象及進(jìn)行比率分析的方法