重組人尿胰蛋白酶抑制劑對(duì)實(shí)驗(yàn)性胰腺炎動(dòng)物的保護(hù)作用及其機(jī)理研究.pdf

1、目的：探討重組人尿胰蛋白酶抑制劑（rhUTI）對(duì)實(shí)驗(yàn)性胰腺炎動(dòng)物的保護(hù)作用及其可能的作用機(jī)制，為其申報(bào)國(guó)家一類新藥與臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。
　　 方法：
　　 1.采用2％牛磺膽酸鈉（0.1mL/100g，0.2mL/min）胰膽管逆行注射法制備急性胰腺炎大鼠模型。將實(shí)驗(yàn)大鼠隨機(jī)分成6組：即對(duì)照組、模型（AP）組、rhUTI（1.75、3.5、7萬(wàn)U/kg）3個(gè)不同劑量組及陽(yáng)性藥烏司他丁（UTI，3.5萬(wàn)U/kg）組，每

2、組10只。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，分別檢測(cè)大鼠血清淀粉酶、尿液淀粉酶、血常規(guī)、腎功能、電解質(zhì)以及胰腺病理組織學(xué)損傷的變化。
　　 2.采用2.5％?；悄懰徕c（1ml/kg）胰膽管逆行注射法制備急性胰腺炎犬模型。將實(shí)驗(yàn)犬隨機(jī)分成6組：即對(duì)照組、模型（AP）組、rhUTI（0.75、1.5、3萬(wàn)U/kg）3個(gè)不同劑量組及陽(yáng)性藥烏司他?。║TI，1.5萬(wàn)U/kg）組，每組6只。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，分別檢測(cè)犬血清淀粉酶、尿液淀粉酶、血常規(guī)、腎功能、電解質(zhì)以

3、及胰腺病理組織學(xué)損傷的變化。
　　 3.采用TUNEL法檢測(cè)急性胰腺炎大鼠胰腺腺泡細(xì)胞凋亡情況；采用免疫組化染色法分別觀察急性胰腺炎大鼠胰腺組織中Fas、Fas-L和Caspase-3蛋白表達(dá)的變化；采用RT-PCR法分別檢測(cè)急性胰腺炎大鼠胰腺組織中Fas、Fas-L和Caspase-3mRNA表達(dá)的變化。
　　 結(jié)果：
　　 1.經(jīng)胰膽管逆行注射2％?；悄懰徕c成功制備急性胰腺炎大鼠模型，與對(duì)照組比較，AP組大鼠

4、的血清淀粉酶、尿液淀粉酶，紅細(xì)胞計(jì)數(shù)，尿素氮、肌酐升高，血清Ca2+降低，胰腺組織充血水腫、灶性壞死并伴有大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。與AP組比較，UTI（3.5萬(wàn)U/kg）及rhUTI（3.5、7萬(wàn)U/kg）對(duì)升高的血清淀粉酶、尿液淀粉酶有降低作用，UTI和rhUTI各劑量組胰腺組織充血水腫減輕、壞死灶減小，炎性細(xì)胞浸潤(rùn)減輕，但UTI和rhUTI各劑量對(duì)急性胰腺炎大鼠血常規(guī)、腎功能和電解質(zhì)變化均未見(jiàn)明顯影響。
　　 2.經(jīng)胰膽管逆行注射

5、2.5％?；悄懰徕c成功制備急性胰腺炎犬模型，與對(duì)照組比較，AP組犬血清淀粉酶于造模后24h、28h和32h升高，且32h達(dá)到高峰，尿液淀粉酶于造模后32h升高，胰腺組織充血水腫、灶性壞死并伴有大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，血清K+和Ca2+分別于造模后24h、8h降低，血常規(guī)、腎功能均未見(jiàn)明顯變化。與AP組比較，UTI和rhUTI各劑量于造模后28h、32h對(duì)升高的血清淀粉酶有降低作用，rhUTI（1.5、3萬(wàn)U/kg）和UTI（1.5萬(wàn)U/kg）

6、對(duì)升高的尿液淀粉酶有降低作用，胰腺病理組織學(xué)檢測(cè)結(jié)果表明：UTI和rhUTI各劑量組胰腺組織充血水腫減輕、壞死灶減小，炎性細(xì)胞浸潤(rùn)減輕。
　　 3.TUNEL法檢測(cè)結(jié)果顯示，正常組大鼠胰腺腺泡細(xì)胞凋亡極少，急性胰腺炎時(shí)腺泡細(xì)胞凋亡指數(shù)升高，病變程度較重的模型組凋亡細(xì)胞少見(jiàn)，與AP組比較，UTI及rhUTI各劑量組凋亡細(xì)胞明顯增多。免疫組化及RT-PCR結(jié)果顯示，在正常組大鼠胰腺組織中即有Fas、Fas-L和 Caspase-3蛋

7、白及mRNA的弱陽(yáng)性表達(dá)，與對(duì)照組比較，AP組大鼠胰腺組織中Fas、Fas-L和 Caspase-3的蛋白及mRNA表達(dá)水平均降低；與AP組比較，UTI和rhUTI各劑量組大鼠胰腺組織中Fas、Fas-L和 Caspase-3的蛋白及mRNA表達(dá)水平明顯升高，且Caspase-3表達(dá)水平在各個(gè)組間的變化趨勢(shì)與 Fas/Fas-L系統(tǒng)的變化趨勢(shì)相一致。
　　 結(jié)論：rhUTI對(duì)急性胰腺炎大鼠和犬有一定的保護(hù)作用，可抑制淀粉酶活性，