豬鏈球菌2型毒力相關蛋白的原核表達及體外試驗評估重組蛋白的免疫源性和保護性.pdf

1、豬鏈球菌 2 型(Streptococcus suis type2)是一種重要的人獸共患病原菌，豬鏈球菌的發(fā)病機制至今仍不十分清楚，能否研制出針對我國致病豬鏈球菌2型的有效疫苗和診斷試劑直接關系著豬鏈球菌病在我國的有效預防和控制。目前豬鏈球菌疫苗主要有3種類型：減毒活疫苗；已發(fā)現(xiàn)的毒力因子；具有免疫原性的細胞壁膜蛋白。本人所在的課題組應用免疫蛋白質組技術體系開展了一定的工作，目前已經(jīng)鑒定了31個豬鏈球菌2型新的免疫原性抗原分子。

2、 在此基礎上針對這些鑒定出的候選分子設計引物，以98江蘇人源分離株98-149菌株基因組為模板，利用PCR技術擴增基因片段，定向克隆至pET232a(+)表達載體中。重組質粒經(jīng)限制性酶切鑒定和測序，轉化至大腸桿菌BL21，IPTG誘導后，獲得了重組蛋白的高效表達。蛋白經(jīng)過鎳親和層析柱層析，獲得純化的重組蛋白。使用Westen-blot驗證了它們的免疫原性后以重組蛋白免疫Wistar大鼠，獲得抗血清并測定滴度大于等于10<'5>閩按ELI