雷尼酸鍶促進(jìn)大鼠股骨骨質(zhì)疏松性骨折愈合的研究.pdf

1、目的： 通過影像學(xué)、組織學(xué)、免疫組織化學(xué)(骨形態(tài)發(fā)生蛋白2，BMP-2)觀察，骨組織形態(tài)計(jì)量學(xué)、骨密度(bone mineral density，BMD)和生物力學(xué)測(cè)量，探討雷尼酸鍶(strontium ranelate，SR)對(duì)大鼠股骨骨質(zhì)疏松性骨折(Osteoporoticfracture，OPF)愈合的影響。 方法： 1.骨質(zhì)疏松動(dòng)物模型的建立：6個(gè)月Wistar雌性處鼠60只，體重220～280 g，大鼠

2、飼養(yǎng)于天津醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心。每只大鼠，用10％水合氯醛(0.3 g/kg)腹腔注射麻醉，麻醉效果滿意后，用雙能X線儀測(cè)量大鼠腰4、5椎體BMD，然后，在無菌條件下經(jīng)背側(cè)切除雙側(cè)卵巢組織，切除組織進(jìn)行組織形態(tài)學(xué)檢查，確保切除組織為卵巢組織。術(shù)后將大鼠放回籠中自由活動(dòng)，常規(guī)飼養(yǎng)。術(shù)后3個(gè)月，再次用雙能X線儀測(cè)量大鼠腰4、5椎體BMD，以確定骨質(zhì)疏松動(dòng)物模型建立成功。將60只骨質(zhì)疏松大鼠隨機(jī)分為兩組，實(shí)驗(yàn)組(SR治療組)和空白對(duì)照組，每組

3、30只。 2.大鼠OPF模型的建立：確定骨質(zhì)疏松動(dòng)物模型建立成功后，兩組大鼠，用同樣的方法進(jìn)行腹腔注射麻醉，麻醉效果滿意后，在無菌條件下，隨機(jī)選一側(cè)股骨，暴露股骨干，在股骨中段行橫行截骨，制作橫行骨折模型，然后用自制加鎖髓內(nèi)針固定，固定效果滿意后，逐層縫合傷口。術(shù)后將大鼠放回籠中，自由活動(dòng)，常規(guī)飼養(yǎng)。 3.給藥方法和劑量：OPF術(shù)后第一天開始，實(shí)驗(yàn)組每只大鼠按400 mg/(kg·d)SR灌胃，對(duì)照組給予同體積的生理鹽水

4、灌胃，共6周。 4.實(shí)驗(yàn)觀察指標(biāo) 4.1影像學(xué)觀察：OPF術(shù)后即刻、2、6周，用X線拍片機(jī)(美國(guó)GE公司)拍CR片，觀察加鎖髓內(nèi)針位置和骨折斷端愈合情況。 4.2組織學(xué)和免疫組織化學(xué)(BMP-2)觀察：OPF術(shù)后2和6周，每組隨機(jī)取5只大鼠，斷頸處死后取骨折處骨痂組織(含骨折斷端，長(zhǎng)約3cm的骨組織)，6周時(shí)加取健側(cè)股骨干骺端，常規(guī)固定、脫水，石蠟包埋，切片，層厚5μm，HE染色和免疫組織化學(xué)染色后鏡檢。

5、 4.3骨組織形態(tài)計(jì)量學(xué)測(cè)量：用染好的OPF術(shù)后6周的健側(cè)股骨干骺端HE切片在Mimics圖像處理與分析系統(tǒng)中進(jìn)行骨形態(tài)學(xué)指標(biāo)骨小梁面積比，骨小梁平均寬度和骨小梁平均間隔的測(cè)量。 4.4BMD測(cè)量：OPF術(shù)后6周對(duì)兩組大鼠用雙能X線儀測(cè)量腰4、5椎體BMD。 4.5生物力學(xué)測(cè)量：OPF術(shù)后6周兩組大鼠取術(shù)側(cè)股骨，拔除加鎖髓內(nèi)針，采用Electro Force3200生物材料實(shí)驗(yàn)儀行三點(diǎn)彎曲實(shí)驗(yàn)。 結(jié)果：

6、1.影像學(xué)觀察結(jié)果：OPF術(shù)后即刻、2周X線檢查示，兩組股骨骨折斷端對(duì)位對(duì)線均良好，未見明顯差異。OPF術(shù)后6周X線顯示，實(shí)驗(yàn)組骨折斷端骨痂較大，整條股骨骨膜下都有不同程度的骨痂形成，骨折線模糊，有連續(xù)骨痂通過骨折斷端；對(duì)照組骨折斷端骨痂較小，骨折線模糊，骨折斷端仍有透亮線存在。 2.組織學(xué)和免疫組織化學(xué)觀察結(jié)果：OPF術(shù)后2周時(shí)，組織學(xué)觀察未見明顯差異，免疫組織化學(xué)染色顯示實(shí)驗(yàn)組BMP-2表達(dá)陽性細(xì)胞數(shù)高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)

7、意義(P<0.01)。OPF術(shù)后6周，組織學(xué)顯示實(shí)驗(yàn)組較對(duì)照組骨痂組織大，有較多的成熟軟骨細(xì)胞，纖維組織少，一些原始骨小梁開始向成熟骨小梁過渡，實(shí)驗(yàn)組在組織學(xué)上比對(duì)照組愈合提前。OPF術(shù)后6周，實(shí)驗(yàn)組BMP-2表達(dá)陽性細(xì)胞數(shù)仍高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。 3.骨組織形態(tài)計(jì)量學(xué)測(cè)量：OPF術(shù)后6周時(shí)，實(shí)驗(yàn)組骨小梁面積比和骨小梁平均寬度高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；骨小梁平均間隔小于對(duì)照組，差異有統(tǒng)

8、計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。 4. BMD測(cè)量結(jié)果：OPF術(shù)后6周時(shí)，實(shí)驗(yàn)組腰4、5椎體BMD高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。 5.生物力學(xué)測(cè)量結(jié)果：OPF術(shù)后6周時(shí)，術(shù)側(cè)股骨三點(diǎn)彎曲實(shí)驗(yàn)顯示，實(shí)驗(yàn)組最大負(fù)荷、最大橈度高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。 結(jié)論： 1.SR有抑制骨質(zhì)吸收和促進(jìn)骨形成的雙重作用。 2.SR能增加骨小梁數(shù)量，使骨小梁增粗，骨小梁間隙變窄，改善骨的顯