拓?fù)涮婵?、順鉑和泰素對宮頸癌細(xì)胞HeLa的抑制及放射增敏作用.pdf

1、目的:拓?fù)涮婵担═PT）通過與拓?fù)洚悩?gòu)酶-Ⅰ結(jié)合并抑制其功能，導(dǎo)致DNA雙鏈斷裂進而誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡。目前拓?fù)涮婵底鳛橐粋€有效的化療藥物和放療增敏劑用于肺癌、頭頸部鱗狀細(xì)胞癌以及卵巢癌的治療。雖不少臨床研究報道拓?fù)涮婵涤糜趯m頸癌化療效果不錯，但用于晚期宮頸癌同步放化療的研究較少。本研究擬設(shè)計體外實驗，研究拓?fù)涮婵祵m頸癌細(xì)胞HeLa的殺傷作用，分析拓?fù)涮婵底鳛榉派湓雒魟┰跉[瘤細(xì)胞中發(fā)揮的作用；同時與順鉑和泰素的放射增敏作用進行比較

2、 方法: 1.培養(yǎng)人子宮頸癌HeLa細(xì)胞，將處于對數(shù)生長期的細(xì)胞用于實驗； 2.不同濃度的拓?fù)涮婵?、順鉑和泰素作用于宮頸癌HeLa細(xì)胞，不同時間后(24小時，48小時和72小時)，應(yīng)用噻唑藍法（MTT法）檢測不同時間組、濃度組吸光光度值，研究三種化療藥物對宮頸癌HeLa細(xì)胞增殖能力的影響，分析抑制作用與時間、劑量的關(guān)系； 3.計算三種藥物24小時 50％抑制濃度（IC50）用于后續(xù)實驗； 4.將He

3、La細(xì)胞分為 a.空白對照組、b.單放射組、c.單化療組和d.放射增敏組，對應(yīng)給予相關(guān)處理后，采用Annexin V/碘化丙啶雙染色法，流式細(xì)胞儀檢測各組細(xì)胞凋亡情況，分析拓?fù)涮婵?、順鉑和泰素的放射增敏作用； 5.將HeLa細(xì)胞分為空白對照組、單放射組、單化療組和放射增敏組，單化療組和放射增敏組予拓?fù)涮婵?、順鉑和泰素作用24小時和48小時后，將單放射組和放射增敏組予以放射線輻射，應(yīng)用細(xì)胞克隆形成法檢測HeLa細(xì)胞增殖能力情況，從

4、而分析各化療藥物聯(lián)合放射線輻射對腫瘤細(xì)胞的殺傷作用； 6.應(yīng)用單擊多靶模型擬合細(xì)胞存活曲線，計算各種參數(shù)以分析各化療藥物聯(lián)合放射線輻射對腫瘤細(xì)胞的抑制作用，并計算拓?fù)涮婵?、順鉑和泰素24小時和48小時時放射增敏比。 結(jié)果: 1.拓?fù)涮婵?、順鉑和泰素對HeLa細(xì)胞增殖的抑制程度，隨作用時間延長和藥物濃度增加，呈時間和濃度依賴性。拓?fù)涮婵挡煌饔脮r間（24小時、48小時、72小時）的IC50分別為8.0 μg/ml，

5、2.6 μg/ml和0.8 μg/ml；順鉑的IC50分別為2.37 μg/ml，0.67 μg/ml和0.11 μg/ml；泰素的IC50分別為0.26 μg/ml，0.09 μg/ml和0.02μg/ml。 2.泰素24小時 IC50僅為泰素血峰值濃度（PPC）的2.0％（0.26:13.6）；而順鉑24小時 IC50為其PPC的62.4％（2.37:3.8），拓?fù)涮婵?4小時 IC50為其PPC 10.7倍的(8:0.75

6、)。 3.流式細(xì)胞儀檢測對照組中凋亡細(xì)胞比例為4.63％，單放射組細(xì)胞凋亡率為14.4％，拓?fù)涮婵祮位熃M細(xì)胞凋亡率為45.7％，放射增敏組為70.2％；順鉑單化療組細(xì)胞凋亡率為43.9％，放射增敏組為78.9％；泰素單化療組細(xì)胞凋亡率為51.7％，放射增敏組為65.3％?？ǚ綑z驗示三種化療藥物的放射增敏組腫瘤細(xì)胞凋亡率均明顯高于單放射組和單化療組。 4.細(xì)胞克隆形成法表明三種化療藥物作用24小時和48小時后聯(lián)合放射線輻

7、射，對HeLa細(xì)胞的殺傷作用明顯增強，提示拓?fù)涮婵?、順鉑和泰素具有放射增敏作用，且化療藥物作用時間越長增敏效果越明顯。 5. 應(yīng)用SigmaPlot軟件按單擊多靶模型 SF=1－(1－e-D/Do)N擬合細(xì)胞存活曲線，計算放射輻射參數(shù)及放射增敏比。拓?fù)涮婵捣派湓雒?4小時組和放射增敏48小時組放射增敏比分別為1.167和1.344；順鉑放射增敏組的放射增敏比分別為1.314和1.538；泰素放射增敏組的放射增敏比分別為1.076

8、和1.316；順鉑放射增敏比最高，泰素最低。 結(jié)論:拓?fù)涮婵怠㈨樸K和泰素對宮頸癌HeLa細(xì)胞抑制作用十分明顯，都呈時間依賴性和濃度依賴性。對比三種藥物血峰值濃度：拓?fù)涮婵?4小時 IC50與其PPC的比值最大（10.7），泰素24小時 IC50與其PPC的比值最小（2.0％）。這提示泰素體外對宮頸癌HeLa細(xì)胞的抗腫瘤作用最強，順鉑次之，而拓?fù)涮婵刁w外抗HeLa細(xì)胞作用比較溫和。進一步放射增敏實驗中，放射增敏組放射增敏比均大于1