As-,2-O-,3-對(duì)人宮頸癌Hela細(xì)胞的放射增敏作用.pdf

1、目的： 觀察三氧化二砷(As2O3)對(duì)人宮頸癌Hela細(xì)胞放射增敏的效應(yīng)，探討其對(duì)官頸癌放射增敏作用的機(jī)制，為As2O3作為官頸癌的放射增敏劑應(yīng)用于臨床提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法： MTT法測(cè)定人宮頸癌Hela細(xì)胞對(duì)As2O3藥物的敏感性，計(jì)算細(xì)胞抑制率=(1-實(shí)驗(yàn)組吸光度值/對(duì)照組吸光度值)×100％，實(shí)驗(yàn)重復(fù)三遍，取平均值，結(jié)果以藥物濃度為橫坐標(biāo)、以細(xì)胞抑制率為縱坐標(biāo)，通過(guò)Excel軟件繪制細(xì)胞生長(zhǎng)抑制曲線，通過(guò)I

2、D50計(jì)算軟件計(jì)算出藥物作用48h后的半數(shù)致死劑量(ID50)。 集落形成法觀察20％ID50的As2O3對(duì)Hela細(xì)胞的放射增敏作用，計(jì)數(shù)含50個(gè)細(xì)胞以上的集落數(shù)，求出細(xì)胞存活分?jǐn)?shù)(細(xì)胞存活率)，細(xì)胞存活率的計(jì)算方法為：處理組集落形成率/對(duì)照組集落形成率，實(shí)驗(yàn)重復(fù)三遍，取平均值，結(jié)果以放射劑量為橫坐標(biāo)、以細(xì)胞存活率為縱坐標(biāo)，采用“多靶單擊模型”通過(guò)SPSS13.0軟件擬合細(xì)胞存活曲線，計(jì)算放射增敏比(SER)。 流式細(xì)

3、胞儀測(cè)定細(xì)胞周期，分為空白對(duì)照組(空白組)、20％ID50的As2O3組(單藥組)、單純放射組(單放組)、放射+20％IDso的As2O3組(藥放組)，每個(gè)組設(shè)3個(gè)平行樣本，于25cm2的培養(yǎng)瓶中接種1×105個(gè)細(xì)胞。收集各組處理后的細(xì)胞進(jìn)行固定、染色，流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期的分布，用Multicycle軟件進(jìn)行分析。 免疫細(xì)胞化學(xué)法及western blotting法(按試劑盒說(shuō)明書(shū)操作)檢測(cè)空白組、單藥組、單放組、藥放組在藥

4、物作用后的p21Wafl/Cipl及Bcl-2兩種蛋白表達(dá)變化情況。 結(jié)果： 1.As2O3對(duì)人宮頸癌Hela細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用隨藥物濃度的增加而增強(qiáng)，48h時(shí)的半數(shù)致死劑量(ID50)值為10.86μmol/L。 2.As2O3對(duì)人宮頸癌Hela細(xì)胞有放射增敏作用，藥放組的細(xì)胞存活率低于單放組，其平均致死劑量(Do)及準(zhǔn)域劑量(Dq)均小于單放組(Do：2.49 Gy vs 3.45 Gy，Dq：1.03 Gy

5、 vs 1.89 Gy)，放射增敏比(SER)為1.39。 3.空白組、單藥組、單放組、藥放組在藥物作用48h后G2/M期的細(xì)胞比例分別為12.45±1.88、18.91±1.65、18.42±2.29、31.07±6.66，統(tǒng)計(jì)分析表明單放及單藥均能提高G2/M期的細(xì)胞比例(P<0.05，P=0.012，P=0.007)，放射及As203藥物聯(lián)合則G2/M期的細(xì)胞比例提高更顯著(P<0.01，P=0.000)。 4.免

6、疫細(xì)胞化學(xué)法及Western blot檢測(cè)各組p21waf1/cip1及Bcl-2兩種蛋白表達(dá)情況基本一致，結(jié)果表明可知放射及藥物均能提高p21waf1/cip1的表達(dá)(P<0.05)，放射及As203藥物聯(lián)合則p21waf1/cip1表達(dá)更高(P<0.01)；放射及藥物均能降低Bcl-2的表達(dá)(P<0.05)，放射及As2O3藥物聯(lián)合則Bcl-2表達(dá)更低(P<0.01)。 結(jié)論： 1.As203對(duì)人宮頸癌Hela細(xì)胞具