蛋白酶體抑制劑硼替佐米聯(lián)合順鉑對宮頸癌細胞增殖的影響.pdf

1、宮頸癌發(fā)病以人乳頭瘤病毒(human papillomavirus，HPV)的感染為最重要的因素。其詳細致癌機制仍在探討之中，人們對其了解正在不斷加深。
　　HPV誘發(fā)宮頸癌的主要機制是其產(chǎn)生的E6和E7兩個癌蛋白分別與抑癌蛋白p53和Rb結(jié)合，經(jīng)過泛素-蛋白酶體途徑誘導(dǎo)兩個抑癌蛋白降解，使其失去對細胞生長周期的正常調(diào)控，導(dǎo)致遺傳基因損傷的積累，最終發(fā)展為腫瘤。據(jù)研究表明，在高危型HPV引起的宮頸癌中，p53和Rb蛋白表達水平降低

2、是由于兩者會經(jīng)過泛素-蛋白酶體途徑降解而導(dǎo)致的。
　　1.蛋白酶體抑制劑硼替佐米聯(lián)合順鉑對富頸癌細胞增殖的影響
　　臨床上硼替佐米（bortezomib，BTZ）單藥同其他常規(guī)化療藥物聯(lián)用治療多骨髓瘤患者取得了良好的療效。順鉑(cisplatin，CIS)為臨床上常用的細胞周期非特異性強效抗癌藥，我們的研究主要是圍繞兩者聯(lián)合處理會對宮頸癌HeLa細胞增殖產(chǎn)生的效果，處理后HeLa細胞內(nèi)抑癌蛋白p53和Rb水平的變化，以及這些

3、變化能否用來為宮頸癌的治療提供一定理論依據(jù)而展開的。
　　目的:觀察蛋白酶體抑制劑硼替佐米聯(lián)合順鉑對宮頸癌HeLa細胞增殖的影響并研究其機制。
　　方法:我們將實驗分為空白對照組、單純順鉑組、單純硼替佐米組、聯(lián)合用藥組，并通過CCK-8法檢測各組細胞的增殖抑制率，Western-blotting檢測各組細胞p53與Rb蛋白的表達，流式細胞儀檢測細胞凋亡比率。
　　結(jié)果與討論:結(jié)果顯示，單純順鉑組及單純硼替佐米藥組細胞生

4、長狀態(tài)差于空白對照組;聯(lián)合用藥組細胞生長狀態(tài)最差，聯(lián)合用藥組細胞增殖抑制率明顯高于其他各組（P＜0.05）。與空白對照組相比，p53表達量在單純順鉑組及聯(lián)合用藥組中明顯升高（P＜0.05），在單純硼替佐米藥組的表達無明顯變化;與空白對照組相比，Rb表達量在單純硼替佐米組中明顯升高（P＜0.05），在其他組的表達無明顯變化。流式結(jié)果顯示順鉑和硼替佐米在誘導(dǎo)細胞凋亡方面具有協(xié)同作用。
　　我們得出結(jié)論，順鉑可能通過調(diào)控p53通路對宮頸

5、癌HeLa細胞增殖產(chǎn)生抑制作用;硼替佐米可能通過調(diào)控Rb通路對宮頸癌HeLa細胞增殖產(chǎn)生抑制作用;蛋白酶體抑制劑硼替佐米聯(lián)合順鉑可以增強對宮頸癌HeLa細胞增殖的抑制作用。
　　2.蛋白酶體抑制劑類化合物的活性篩選
　　PI-1840是一種1，2，4-惡二唑類化合物，其對蛋白酶體β5亞基有很高的抑制率，IC50值很低，我們的合作伙伴以其為先導(dǎo)，將其核心結(jié)構(gòu)惡二唑環(huán)，分別用三唑環(huán)、咪唑環(huán)和呋喃環(huán)合成了003、007、013系列

6、的衍生物，即蛋白酶體抑制劑類化合物。
　　目的:我們對這些化合物進行活性篩選，為求能發(fā)現(xiàn)接近甚至高于PI-1840對宮頸癌細胞抑制率的化合物，同時為設(shè)計下一步的篩選工作提供理論依據(jù)。
　　方法:首先確定PI-1840在HeLa細胞中的IC50，然后使用此濃度作為實驗濃度，將各實驗化合物配置成溶液;使用CCK-8法檢測各化合物對HeLa細胞增殖的抑制率，篩選出HeLa抑制活性接近甚至超過PI-1840的化合物。
　　結(jié)果