對蝦免疫活性物質作用效果及機制的初步研究.pdf

1、近年來，嚴重的暴發(fā)性養(yǎng)殖蝦類疾病，使我國水產業(yè)蒙受了巨大損失。在認識到使用抗生素等藥物的負面影響后，人們己把注意力轉移到調動或激活蝦類自身的免疫系統。對蝦的免疫機能與對蝦的健康密切相關。免疫增強劑能提高動物的免疫機能，促進動物的健康，增強動物的抗病力。 本試驗分3個內容進行，莒在研究WSSV卵黃抗體[Ig-Guard(shrimp)]作為一種免疫增強劑，對中國對蝦、凡納濱對蝦的非特異性免疫及抗病毒能力的影響，及對克氏原螯蝦LD5

2、0的影響。 WSSV卵黃抗體提高中國對蝦抗白斑綜合征病毒感染力的研究：在基礎飼料中分別添加3個水平(1％、0.5％、0.1％)的Ig-Guard(shrimp)制成3種試驗飼料，同時以基礎飼料為空白對照，以P280 Premix為陽性對照。采用連續(xù)投喂的方法，飼喂中國對蝦(Penaeus chmemB)21d，分別測定了第7，14，21 d血淋巴的酚氧化酶(PO)、溶茵酶(U<,L>)、酸性磷酸酶(ACP)、超氧化物歧化酶(SO

3、D)活力，并對血藍蛋白進行定量。結果顯示這些免疫指標均能不同程度的被Ig-Guard(shrimp)促進。在免疫試驗結束時，1％Ig-Guard(shrimp)組PO、U<,L>、SOD活力與空白對照組均無顯著差異(P>0.05)，ACP活力與空白對照組有顯著差異(P<0.05)；PO、U<,L>、SOD、ACP活力與陽性對照組均有顯著(P<0.05)或極顯著差異(P<0.01)。0.5％Ig-Guard(shrimp)、0.1％Ig-

4、Guard(shrimp)組的PO、ACP、SOD與空白對照組均有極顯著差異(P<0.01)，0.5％Ig-Guard(shrimp)U<,L>與空白對照組無顯著差異(P>0.05)，0.1％Ig-Guard(shrimp)U<,L>與空白對照組有極顯著差異(P<0.01)；0.5％Ig-Guard(shrimp)組的U<,L>、ACP、SOD活力與陽性對照組有極顯著(P<0.01)或顯著差異(P<0.05)，PO活力與陽性對照組無顯著

5、差異(P>0.05)，0.1％Ig-Guard(shrimp)組的四種免疫因子活力與陽性對照組均無顯著差異(P>0.05)。在第21 d，用白斑綜合征病毒(WSSV)投喂感染。雖然感染后的11 d內，免疫組對蝦和對照組對蝦均全部死亡，但是相對于對照組來說Ig-Guard(shrimp)對對蝦的死亡具有一定的延遲作用，尤其是低劑量攻毒時的0.1％劑量組，效果尤為明顯。但是在高劑量攻毒的情況下，Ig-Guard(shrimp)并沒有顯示出很

6、好的保護效果。 WSSV卵黃抗體對凡納濱對蝦免疫相關酶活力和抗病力影響的研究：在基礎飼料中分別添加3個水平(1％、0.5％、0.1％)的Ig-Guard(shrimp)制成3種試驗飼料，同時以基礎飼料為空白對照。采用連續(xù)投喂的方法，飼喂凡納濱對蝦(Litopenaeus vannamei)20 d，分別測定了第5，10，15，20 d血淋巴的酚氧化酶(PO)、溶菌酶(U<,L>)、酸性磷酸酶(ACP)、堿性磷酸酶(AKP)及肌肉勻漿液的

7、超氧化物歧化酶(SOD)、過氧化氫酶(CAT)等非特異性免疫因子活性，并對血清及肌肉勻漿液中蛋白進行定量。結果表明，免疫組的PO、U<,L>、ACP、AKP、SOD、CAT活力均顯著高于對照組(P<0.05)。到免疫試驗結束時，1％Ig-Guard(shrimp)、0.5％Ig-Guard(shrimp)兩組的PO活力與對照組無顯著差異(P>0.05)，0.1％Ig-Guard(shrimp)組與對照組有顯著差異(P<0.05)；0.5

8、％Ig-Guard(shrimp)組U<,L>活力與對照組有顯著差異(P<0.05)，1％Ig-Guard(shrimp)、0.1％Ig-Guard(shrimp)兩組與對照組均無顯著差異(P>0.05)；1％Ig-Guard(shrimp)組ACP活力與對照組無顯著差異(P>0.05)，0.5％Ig-Guard(shrimp)和0.1％Ig-Guard(shrimp)組分別與對照組有顯著差異(P<0.05)和極顯著差異(P<0.01)

9、；1％Ig-Guard(shrimp)、0.5％Ig-Guard(shrimp)、0.1％Ig-Guard(shrimp)三組的AKP活力與對照組均有極顯著差異(P<0.01)；1％Ig-Guard(shrimp)、0.5％Ig-Guard(shrimp)、0.1％Ig-Guard(shrimp)三組的SOD、CAT活力與對照組無顯著差異(P>0.05)。免疫20 d后，用白斑綜合征病毒(WSSV)投喂感染。攻毒后第7 d各免疫組的相對

10、免疫保護率分別為17.95％、23.08％、35.90％。結果說明，Ig-Guard(shrimp)能有效提高對蝦免疫因子的活性，對于提高抗WSSV感染能力也有一定作用。 WSSV卵黃抗體保護克氏原螯蝦防御白斑綜合征病毒的研究：在基礎飼料中分別添加3個水平(1％、0.5％、0.1％)的Ig-Guard(shrimp)制成3種試驗飼料，同時以基礎飼料為空白對照。以克氏原螯蝦(Procambarus clarkii)為模式動物，采用

11、連續(xù)投喂的方法，免疫21 d后，用白斑綜合征病毒(WSSV)肌肉注射感染。注射相同稀釋濃度的螯蝦，其死亡率與添加Ig-Guard(shrimp)的劑量呈負相關，即添加Ig-Guard(shrimp)劑量越高，其死亡率越低：免疫組螯蝦的半數致死劑量(LD50)高于對照組的半數致死劑量，而且其效果隨著免疫劑量的增加而越來越明顯。結果說明，Ig-Guard(shrimp)能延遲螯蝦的死亡時間，在一定程度上對于提高抗WSSV感染能力有一定作用。

12、對于特異性免疫系統尚不明確的對蝦來說，信號識別蛋白在防御病原微生物過程中的作用尤為重要。到目前為止，已經成功地從對蝦體內分離出β-1，3-葡聚糖結合蛋白(βGBP)、脂多糖結合蛋白(LBP)，但是始終沒有關于對蝦肽聚糖識別蛋白(PORP)的報道。我們之前的研究證實肽聚糖和Ig-Guard(shrimp)類似，也能夠激活對蝦體內酚氧化酶系統的活性及其它非特異性免疫因子活性，提高抗病力，這意味著PGRP有可能在對蝦中存在。為了證明這一推測，