刺糖多糖的免疫活性及作用機(jī)制的初步研究.pdf

1、目的：主要研究維藥刺糖多糖(polysaccharide from Saccharum Alhagi，SAP)對(duì)小鼠體內(nèi)及體外免疫活性，并初步探討其免疫活性作用機(jī)制。
　　方法：
　　(1)采用水提醇沉法從刺糖中提取多糖SAP，并制備了50％醇沉刺糖多糖SAP-1和80%醇沉刺糖多糖SAP-2。
　　(2)建立腹腔注射環(huán)磷酰胺免疫抑制小鼠動(dòng)物模型，小鼠灌胃給 SAP，利用碳粒廓清實(shí)驗(yàn)測定非特異性免疫功能；血清溶血素實(shí)驗(yàn)

2、反映抗體生成水平；測定血清中細(xì)胞因子IL-2、IFN-γ、IL-10、IL-6的生成水平來評(píng)價(jià)SAP的免疫活性。
　　(3)從小鼠體內(nèi)提取脾淋巴細(xì)胞，分別用SAP-1和SAP-2干預(yù)處理，采用CCK-8法考察藥物對(duì)脾淋巴細(xì)胞的增殖活性，并用ELISA法檢測細(xì)胞因子IL-2、IL-6、IL-10、IFN-γ、IL-12的濃度。
　　(4)經(jīng)SAP-1和SAP-2干預(yù)的小鼠巨噬細(xì)胞RAW264.7，采用MTT法考察其增殖活性，采

3、用中性紅實(shí)驗(yàn)考察吞噬功能，分別利用Griess試劑盒和ELISA試劑盒檢測NO的生成水平和細(xì)胞因子IL-2、TNF-α、IL-1β的濃度。
　　(5)采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測SAP-1和SAP-2對(duì)小鼠脾淋巴細(xì)胞和小鼠巨噬細(xì)胞RAW264.7中相關(guān)基因表達(dá)調(diào)控的影響。
　　(6)通過SAP-1和SAP-2對(duì)羥自由基和超氧陰離子的清除能力，考察其抗氧化活性。
　　結(jié)果：
　　(1)通過測定SAP對(duì)免疫抑制小鼠中

4、的碳粒廓清率和血清溶血素水平。結(jié)果表明，高濃度的SAP能使免疫抑制小鼠的吞噬功能和抗體生成水平恢復(fù)正常，并能夠提升免疫抑制小鼠血清中細(xì)胞因子IL-2、IL-6的含量。
　　(2)根據(jù)CCK-8法測定脾淋巴細(xì)胞的增殖活性。結(jié)果表明，SAP-1和SAP-2在高濃度時(shí)，對(duì)小鼠體外脾淋巴細(xì)胞有增殖作用，能夠增強(qiáng)由脾淋巴細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子IL-12、IL-6和IL-10。
　　(3)通過MTT法測定RAW264.7的增殖活性。結(jié)果表明

5、，高濃度的SAP-1和SAP-2對(duì)巨噬細(xì)胞RAW264.7的增殖和細(xì)胞因子IL-2、TNF-α、IL-1β均有促進(jìn)作用，還可增強(qiáng)巨噬細(xì)胞RAW264.7的吞噬功能和NO的生成水平。
　　(4)實(shí)時(shí)熒光定量法的測定結(jié)果表明，SAP-1和SAP-2能上調(diào)脾淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞RAW264.7中IL-6、TNF-α、NF-κB、IL-1β、iNOS的基因表達(dá)調(diào)控水平。
　　(5)通過對(duì)羥基自由基和超氧陰離子清除率的測定結(jié)果表明，SA

6、P-1和SAP-2濃度為15mg·mL-1時(shí)對(duì)羥自由基的清除能力與對(duì)照品相同，而對(duì)超氧陰離子的清除能力較弱。
　　結(jié)論：
　　(1)刺糖多糖SAP能增強(qiáng)疫抑制小鼠的體內(nèi)免疫功能。
　　(2)SAP-1和SAP-2均能夠促進(jìn)脾淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞RAW264.7的增殖及細(xì)胞免疫活性，且SAP-1作用較強(qiáng)。
　　(3)通過對(duì)基因表達(dá)調(diào)控的考察推測，SAP-1和SAP-2可能通過NF-κB的信號(hào)傳導(dǎo)來調(diào)控免疫因子相關(guān)基因