IBDV基因疫苗的制備及免疫效果的初步研究.pdf

1、傳染性法氏囊病（Infectious bursal disease，IBD）是由傳染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease virus，IBDV)引起的雞和火雞的一種高度接觸性傳染病，對世界養(yǎng)禽業(yè)危害極大，接種疫苗是預防該病最有效的途徑。當前通用的活疫苗有毒力返強的風險，而核酸疫苗則是將編碼某種抗原蛋白的外源基因直接導入到動物體內(nèi)，表達抗原蛋白，并持續(xù)誘導宿主產(chǎn)生對該抗原蛋白免疫應答，因而更安全并得到了廣泛的

2、研究。VP2蛋白是IBDV的主要結(jié)構(gòu)蛋白又含有病毒的主要的抗原保護性位點，是理想的抗原蛋白，可作為DNA疫苗的首選基因。
　　 本研究參照IBDV(HuBei株)序列，使用PRIMER5.0軟件設(shè)計并合成引物，并在引物兩端兩個設(shè)計了酶切位點(NheI/HindⅢ)，通過聚合酶鏈反應(PCR)擴增并克隆了IBDV(HuBei株)的VP2基因。然后將VP2插入真核表達質(zhì)粒pcDNA3.1(+)中，置于高效CMV啟動子的調(diào)控之下，構(gòu)建

3、成DNA疫苗重組表達質(zhì)粒pc-VP2,并成功轉(zhuǎn)染HEK-293細胞，在轉(zhuǎn)染48小時后，進行間接免疫熒光試驗，篩選出陽性重組表達的質(zhì)粒。
　　 利用免疫重組質(zhì)粒pc-VP2及化學佐劑磷酸鈣配合分組免疫接種14日齡非免疫肉雞70只，隨機分為7組，每組10只，自由采食飲水。所有試驗雞分別于首免后7，14，21，28天翅下靜脈采血，分離血清，ELISA法檢測血清抗體，并同時采集抗凝血，用于檢測外周血淋巴細胞增殖情況。結(jié)果顯示：含有VP2

4、基因免疫質(zhì)粒DNA與化學佐劑共同免疫組的血清ELISA抗體水平顯著高于空白組及空載體組(p＜0.05)，與其它各組差異不顯著，但略高于其它各組；各質(zhì)粒免疫組淋巴細胞增殖活性均高于空白對照組，G組（商品疫苗）的淋巴細胞在免疫后7天得到了有效的增殖，與其他各組差異顯著(P＜0.05)。攻毒試驗結(jié)果表明：質(zhì)粒免疫組E組和F組與商品疫苗組保護率最高，達到70％，與對照組保護率(20％)差異極顯著(P＜0.01)。
　　 所有試驗結(jié)果表明