融合細(xì)胞因子影響HBV preS2S基因疫苗免疫效果的初步研究.pdf

1、該研究中我們選擇HBV preS2+S基因片段作為DNA疫苗的靶抗原,應(yīng)用分子克隆技術(shù)構(gòu)建了pcDNA3.1S2S、pcDNA3.1S2S/IFNα、pcDNA3.lIL-2/Fc、pcDNA3S2S/Fc、pcDNA3IFN-α五種真核表達(dá)質(zhì)粒,并在Vero-E6或SP2/0真核細(xì)胞中進(jìn)行了瞬時(shí)表達(dá);重組質(zhì)粒經(jīng)大量制備純化后免疫BALB/c小鼠,通過(guò)檢測(cè)各組小鼠免疫后的抗-HBs滴度、CTL的殺傷活性、培養(yǎng)脾細(xì)胞的增殖分析、培養(yǎng)脾細(xì)胞

2、細(xì)胞因子的分泌水平以及脾細(xì)胞中CD25的表達(dá)量,比較分析了含IL-2/Fc的質(zhì)粒作為基因型佐劑對(duì)HBV preS2S DNA疫苗誘發(fā)免疫反應(yīng)的影響;并且分析比較了pcDNA3.1S2S/IFNα和pcDNA3S2S/Fc分別免疫后誘發(fā)的體液和細(xì)胞免疫反應(yīng).主要研究?jī)?nèi)容和結(jié)果如下:1.應(yīng)用分子克隆技術(shù),構(gòu)建五種真核表達(dá)質(zhì)粒pcDNA3.1S2S、pcDNA3.1S2S/IFN-α、pcDNA3.1IL-2/Fc、pcDNA3S2S/Fc、

3、pcDNA3IFNα,經(jīng)酶切和序列測(cè)定分析,確定目的片段的克隆和連接正確.2.通過(guò)脂質(zhì)體介導(dǎo),分別將它們轉(zhuǎn)染入Vero-E6或SP2/0細(xì)胞中,經(jīng)ELISA和間接免疫熒光法證實(shí),可以在真核細(xì)胞中正確表達(dá)目的蛋白.3.采用布比卡因預(yù)處理,100μg/只/次的方法肌肉注射后肢股四頭肌分組免疫BALB/c小鼠,分別檢測(cè)誘導(dǎo)的體液和細(xì)胞免疫反應(yīng).4.pcDNA3.lIL-2/Fc免疫組在初次免疫后2周末即出現(xiàn)100％的抗-HBs抗體陽(yáng)轉(zhuǎn)率,CT

4、L殺傷活性、淋巴細(xì)胞的增殖反應(yīng)、Th1型細(xì)胞因子的分泌水平及脾細(xì)胞CD25的表達(dá)量都比對(duì)照組明顯增強(qiáng).5.為了確定抗原與佐劑的最佳應(yīng)用方案,我們比較HBV DNA疫苗免疫后第3天注射佐劑pcDNA3.lIL-2/Fc或兩者同時(shí)注射誘導(dǎo)體液和細(xì)胞免4疫效果,證明前者優(yōu)于后者,后者誘導(dǎo)的免疫反應(yīng)和HBV DNA疫苗單獨(dú)應(yīng)用時(shí)效果相當(dāng).6.我們同時(shí)進(jìn)行了HBV preS2S與IFN-α融合表達(dá)的重組質(zhì)粒pcDNA3.1S2S/IFNα的實(shí)驗(yàn).