甘草調(diào)和諸藥的配伍機(jī)制及保肝作用研究.pdf

1、目的:本研究首先從分子水平上考察甘草中的主要單體成分甘草酸對(duì)人HepG2細(xì)胞中細(xì)胞色素P450 3A4酶在轉(zhuǎn)錄及蛋白水平表達(dá)的影響，并且對(duì)其誘導(dǎo)細(xì)胞色素P450 3A4酶的調(diào)控機(jī)制進(jìn)行初步探討。同時(shí)觀察了甘草及甘草酸對(duì)石膽酸所致小鼠肝損傷的保護(hù)作用，為中藥甘草調(diào)和諸藥，保肝解毒的理論提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法: RT-PCR及Western-blot技術(shù)分別用于檢測(cè)甘草酸對(duì)CYP3A4 mRNA及蛋白表達(dá)的影響；瞬時(shí)共轉(zhuǎn)染熒光素

2、酶報(bào)告基因和凝膠電泳遷移技術(shù)（EMSA）用于甘草酸對(duì)CYP3A4 誘導(dǎo)表達(dá)調(diào)控機(jī)制的研究；利用過(guò)量石膽酸造成小鼠肝臟損傷的病理模型觀察甘草及甘草酸對(duì)肝臟損傷的保護(hù)作用。
　　 結(jié)果: RT-PCR結(jié)果顯示，甘草酸能濃度和時(shí)間依賴性地使HepG2細(xì)胞中CYP3A4 mRNA的表達(dá)上調(diào)。同時(shí)，Western-blot結(jié)果顯示，HepG2細(xì)胞在給予甘草酸后CYP3A4 蛋白的表達(dá)也呈濃度依賴性的升高，與mRNA水平變化相一致。報(bào)告基因

3、和EMSA結(jié)果顯示，甘草酸可通過(guò)直接激活PXR受體，進(jìn)而誘導(dǎo)CYP3A4基因及蛋白表達(dá)的增加。整體動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的結(jié)果顯示，甘草及甘草酸各劑量組能有效逆轉(zhuǎn)LCA所致肝損傷小鼠外周血ALT及AST的升高，組織學(xué)檢查發(fā)現(xiàn)，小鼠在給予甘草和甘草酸后，肝細(xì)胞的壞死程度得到明顯改善，而甘草和甘草酸對(duì)LCA所致小鼠肝損傷的保護(hù)作用可能與其調(diào)控LCA合成及代謝的關(guān)鍵基因SHP，CYP7A1及CYP3A11的表達(dá)有關(guān)。
　　 結(jié)論:甘草酸具有對(duì)CYP

4、3A4酶的誘導(dǎo)效應(yīng)，可能產(chǎn)生基于藥物代謝酶的草藥-化學(xué)藥之間的相互作用 (herb-drug interaction)；甘草調(diào)和諸藥的配伍機(jī)制可能與其參與對(duì)細(xì)胞色素P450 3A4的誘導(dǎo)表達(dá)進(jìn)而使與其同服的其它中藥或中藥復(fù)方中的毒性成分的代謝加速而起到緩和藥性，進(jìn)而達(dá)到調(diào)和諸藥的目的，而對(duì)CYP3A4的誘導(dǎo)表達(dá)作用可能是通過(guò)甘草-PXR-CYP3A4核受體激活途徑來(lái)發(fā)揮效應(yīng)的。 同時(shí)利用過(guò)量石膽酸造成的肝損傷模型，為進(jìn)一步探討其保肝解毒