內皮前體細胞動員的藥物干預效果比較及對心肌梗死的療效觀察.pdf

1、目的： 1．選用小鼠藥物性心肌梗死模型，觀察普伐他汀與粒細胞集落刺激因子對內皮前體細胞的動員規(guī)律并比較兩者的動員效果及特點，篩選最佳動員藥物及最佳干預時間。 2．探討不同麻醉深度和呼吸管理模式下，結扎冠狀動脈前降支制作大鼠急性心肌梗死模型的優(yōu)劣，觀察心臟形態(tài)學及心功能變化。 3．采用粒細胞集落刺激因子動員內皮前體細胞治療大鼠心肌梗死，通過心臟超聲檢查、病理分析及在體和離體心功能測定，全面評價粒細胞集落刺激因子對心

2、肌梗死大鼠的心功能改善作用。 4．觀察常用靜脈麻醉藥異丙酚和咪唑安定對血管內皮生長因子釋放的影響以及對內皮前體細胞粒細胞集落刺激因子動員效果的影響。 方法： 1．采用腹腔注射異丙腎上腺素制作小鼠藥物性心肌梗死模型，待模型動物穩(wěn)定后，分別注射普伐他汀、粒細胞集落刺激因子及等量生理鹽水5天，觀察用藥開始第1、5、7、9天的CD34+單個核細胞及內皮前體細胞的數目，測定血漿中血管內皮生長因子的濃度并對兩者進行相關性分析

3、。 2．在分別采用面罩通氣法及氣管切開法的呼吸管理模式下，利用結扎冠狀動脈前降支制作大鼠急性心肌梗死模型，記錄存活率與麻醉蘇醒時間；進行HE染色、Masson染色和伊文氏蘭/TFC染色確定心肌梗死模型的成功；四周后行在體心功能測定，并采用Langendorff裝置進行不同前負荷下心功能變化的離體測定。 3．雄性Wistat大鼠36只，隨機分為對照組、心肌梗死組和粒細胞集落刺激因子組，其中粒細胞集落刺激因子組腹腔注射粒細胞

4、集落刺激因子5天，對照組和心肌梗死組腹腔注射等量生理鹽水5天。于用藥開始第7天時球后靜脈采血，流式細胞儀測定CD34+單個核細胞及內皮前體細胞的數目；ELISA測定血漿血管內皮生長因子和C-反應蛋白的濃度； RT-PCR檢測心肌梗死交界區(qū)血管內皮生長因子及其受體FLK-1mRNA的表達。第4周時通過超聲、病理及在體和離體心功能測定，對心肌梗死大鼠的心功能進行全面評價。 4．大鼠急性心肌梗死模型穩(wěn)定后隨機選取36只，連續(xù)腹腔注射粒

5、細胞集落刺激因子5天，隨機分為三組，于用藥開始第7天時分別持續(xù)泵入生理鹽水、咪唑安定及丙泊酚，6h后球后靜脈采血，流式細胞儀測定CD34+單個核細胞及內皮前體細胞的數目；ELISA測定血漿血管內皮生長因子和C-反應蛋白的濃度； RT-PCR檢測心肌梗死交界區(qū)血管內皮生長因子及其受體FLK-1mRNA的表達。于第4周時行在體心功能測定后，處死大鼠取梗死交界區(qū)心肌組織行CD34免疫熒光染色，觀察并測量血管密度。 結果： 1．

6、CD34+單個核細胞和內皮前體細胞的數目及血漿中血管內皮生長因子的濃度均于用藥開始第7天時達到高峰；粒細胞集落刺激因子的動員作用遠遠大于普伐他汀的動員效果；粒細胞集落刺激因子動員內皮前體細胞的作用強于對CD34+單個核細胞的動員作用。 2．兩種通氣方法下均可制備確定的心肌梗死模型，存活率無差別，HE染色、Masson染色和伊文氏蘭/TTC染色均可觀察到明顯的心肌梗死區(qū)。在體及離體心功能測定兩者無差別，但與對照組相比，心臟的收縮、

7、舒張及儲備功能均顯著下降。 3．粒細胞集落刺激因子提高了血漿中血管內皮生長因子的濃度，增強了心肌組織中血管內皮生長因子及其受體FLK-1mRNA的表達，增加了外周血中CD34+單個核細胞和內皮前體細胞的數目，使心肌梗死交界區(qū)的毛細血管密度增加，同時超聲及在體和離體心功能測定結果顯示心肌梗死大鼠的心功能得到改善。 4．咪唑安定可以促進血管內皮生長因子的釋放，并使粒細胞集落刺激因子動員內皮前體細胞的作用加強，促進了心肌梗死交

8、界區(qū)血管的新生。而丙泊酚無以上兩種作用。但是，兩種靜脈麻醉藥均對心肌梗死后的心功能有改善作用。 結論： 1．普伐他汀與粒細胞集落刺激因子均有動員內皮前體細胞的作用，均能提高血漿中血管內皮生長因子濃度及組織中血管內皮生長因子的表達。其中，粒細胞集落刺激因子對內皮前體細胞的動員作用與血漿中血管內皮生長因子濃度的增加有關。 2．采用面罩通氣行呼吸管理，結扎冠狀動脈前降支制作大鼠心肌梗死模型，與傳統(tǒng)的氣管切開法相比較，提

9、高了制作動物模型的速度，此外避免了氣管切開導致的頸部粘連，為心功能評價時分離右側頸總動脈置入心導管及氣管切開制作Langendoff模型創(chuàng)造了良好的條件。 3．粒細胞集落刺激因子能夠動員骨髓中的內皮前體細胞進入外周血并進而歸巢于缺血區(qū)，增加心肌梗死交界區(qū)毛細血管的密度，改善心肌梗死大鼠的心功能，因此，粒細胞集落刺激因子用于內皮前體細胞動員治療急性心肌梗死在臨床上是有應用前景的。 4．咪唑安定能夠加強粒細胞集落刺激因子動員