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1、第一部分鼠外周血內(nèi)皮祖細(xì)胞體外培養(yǎng)與鑒定 目的:探討鼠外周血來源的血管內(nèi)皮祖細(xì)胞(EPCs)體外培養(yǎng)及鑒定的方法。 方法:從大鼠心臟采集外周血,以密度梯度離心法分離單個核細(xì)胞(MNC),置于ECM-2培養(yǎng)基中培養(yǎng)。用Dil標(biāo)記的乙酰化低密度脂蛋白(Dil-acLDL)攝取試驗和FITC標(biāo)記的荊豆凝集素(FITC-UEA-1)結(jié)合試驗,免疫熒光法檢測其Dil-acLDL、FITC-UEA-1的表達(dá)。 結(jié)果:從大鼠外
2、周血MNC中可成功地培養(yǎng)出EPCs。培養(yǎng)獲得的EPCs可吞噬acLDL并與UEA-1相結(jié)合,其表型為Dil-acLDL+、FITC-UEA-1+。 結(jié)論:用密度梯度離心法從大鼠外周血MNC中可成功地培養(yǎng)出EPCs。 第二部分內(nèi)皮祖細(xì)胞移植對大鼠心肌梗死后缺血心肌血管再生及心功能的影響 目的:探討大鼠內(nèi)皮祖細(xì)胞(EPCs)移植對大鼠心肌梗死后血管再生及對心功能的影響。 方法:分離培養(yǎng)大鼠EPCs,免疫熒光法
3、檢測其Dil-acLDL、FITC-UEA-1的表達(dá)。將Wistar大鼠冠狀動脈左前降支結(jié)扎復(fù)制急性心肌梗死模型后,在梗死心肌處植入Brdu標(biāo)記的EPCs(實驗組)及EBM-2培養(yǎng)液(對照組)。另設(shè)假手術(shù)組15只為正常對照。移植后4周,心臟超聲檢查心功能,并對梗死區(qū)心肌組織進(jìn)行移植細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查及毛細(xì)血管密度測定。 結(jié)果:培養(yǎng)獲得EPCs,其表型為Dil-acLDL+、FITC-UEA-1+。植入梗死區(qū)的EPCs可以分化為血管內(nèi)
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