PCNA、P16在大鼠頸總動脈球囊損傷后的表達(dá)及ATRA干預(yù)作用研究.pdf

1、目的: 研究大鼠頸總動脈球囊損傷后內(nèi)膜增生情況及全反式維甲酸(all-transretinoic acid，ATRA)對血管平滑肌細(xì)胞(vascular smooth muscle cell，VSMC)增殖細(xì)胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen，PCNA)及P16基因表達(dá)的影響，探討ATRA對球囊損傷頸總動脈內(nèi)膜增生的影響及可能的作用機(jī)制，為ATRA防治經(jīng)皮腔內(nèi)血管成形術(shù)(percuta

2、neous transluminal coronaryangioplasty，PTCA)后再狹窄(restenosis)提供理論依據(jù)。 方法: 雄性SD大鼠64只，隨機(jī)分成假手術(shù)組(8只)；單純球囊損傷組(32只，包括2天、7天、14天、28天組)；全反式維甲酸(ATRA)干預(yù)組(24只，包括對照組、ATRA正常劑量組(30mg.kg-1.d-1)，ATRA強(qiáng)化劑量組(60mg.kg-1.d-1)，每個(gè)亞組各8只)；建立

3、大鼠頸總動脈球囊損傷模型，蘇木素-伊紅(HE)染色光鏡下觀察血管內(nèi)膜增生情況；應(yīng)用RT-PCR觀察PCNA、P16 mRNA表達(dá)情況，免疫組化方法觀察PCNA、P16蛋白表達(dá)情況。 結(jié)果: 單純球囊損傷后7天內(nèi)膜開始增厚，內(nèi)膜厚度隨時(shí)間逐漸增加，第28天內(nèi)膜與中膜厚度的比值最大(2.30±0.05vs0.02±0.002，P<0.05)。正常劑量ATRA干預(yù)后內(nèi)膜增生減輕，內(nèi)膜與中膜厚度比值減小(1.69±0.08vs2

4、.35±0.07，P<0.05)；強(qiáng)化劑量ATRA干預(yù)后內(nèi)膜增生進(jìn)一步減輕，內(nèi)膜與中膜厚度比值進(jìn)一步減小(1.22±0.07vs2.35±0.07，P<0.05)。PCNA、P16蛋白在正常血管組織極少表達(dá)，PCNA蛋白球囊損傷后7天在內(nèi)膜表達(dá)最多(40.74±1.66 vs1.26±0.06，P<0.05)，P16蛋白球囊損傷后各時(shí)間點(diǎn)在血管組織的表達(dá)無明顯變化；ATRA劑量依賴性的抑制PCNA蛋白的表達(dá)；同時(shí)促進(jìn)P16蛋白的表達(dá)。單

5、純球囊損傷術(shù)后7天PCNA mRNA轉(zhuǎn)錄最多(1.29±0.07vs0.21±0.02，P<0.05)：ATRA劑量依賴性的抑制PCNA mRNA的轉(zhuǎn)錄；同時(shí)促進(jìn)P16 mRNA的轉(zhuǎn)錄。 結(jié)論: 大鼠頸總動脈球囊損傷后內(nèi)膜增生明顯，PCNA mRNA及PCNA蛋白表達(dá)增高。全反式維甲酸可劑量依賴性的抑制球囊損傷后血管內(nèi)膜的增生，下調(diào)PCNA mRNA及PCNA蛋白的表達(dá)，同時(shí)上調(diào)P16 mRNA及P16蛋白的表達(dá)。全反式