大鼠頸動(dòng)脈球囊損傷后再狹窄形成中內(nèi)膜增生和血管重塑的作用及CREG表達(dá)變化.pdf

1、研究背景及目的經(jīng)皮冠狀動(dòng)脈腔內(nèi)成形術(shù)(PTCA)是冠心病治療學(xué)上的一項(xiàng)重大突破,但再狹窄的高發(fā)生率嚴(yán)重影響了PTCA的遠(yuǎn)期療效.目前認(rèn)為,再狹窄主要機(jī)理為擴(kuò)張動(dòng)脈段的彈性回縮、血管平滑肌細(xì)胞(VSMC)遷移與增殖、細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)合成、管壁重塑以及血栓的參與和機(jī)化.血管內(nèi)皮損傷誘發(fā)的VSMC增殖及向內(nèi)膜遷移、隨之引起的內(nèi)膜增生被認(rèn)為是PTCA術(shù)后再狹窄的主要病理機(jī)制.近年發(fā)現(xiàn)血管幾何構(gòu)型改變,即血管重塑對(duì)PTCA術(shù)后管腔丟失亦具有重

2、要的作用.再狹窄形成過程中內(nèi)膜增生與血管重塑的關(guān)系及在管腔丟失中兩者的協(xié)同作用,尚未完全闡明.VSMC由收縮表型向合成表型轉(zhuǎn)化是VSMC增殖與遷移的關(guān)鍵性起始步驟,但VSMC表型轉(zhuǎn)化的基因調(diào)控機(jī)制尚未明確.近期我們以人VSMC HITASY克隆株,采用差異顯示PCR法發(fā)現(xiàn)E1A激活基因細(xì)胞阻遏子(CREG)可能與VSMC的分化和表型調(diào)控有關(guān).但CREG對(duì)VSMC功能的影響目前國(guó)內(nèi)外尚未見報(bào)道.該研究采用了大鼠頸動(dòng)脈內(nèi)膜損傷模型,通過動(dòng)態(tài)

3、觀察大鼠頸動(dòng)脈內(nèi)膜損傷后血管壁各成份結(jié)構(gòu)的變化,檢測(cè)新生內(nèi)膜中增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)和平滑肌α肌動(dòng)蛋白(SM α-actin)的表達(dá)變化及血管壁中CREG mRNA、蛋白表達(dá)的動(dòng)態(tài)變化,旨在探討:(1)再狹窄形成過程中內(nèi)膜增生與血管重塑的發(fā)生規(guī)律和兩者相互關(guān)系及在管腔丟失中兩者的協(xié)同作用.(2)再狹窄形成過程中VSMC增殖和表型轉(zhuǎn)化的規(guī)律及CREG在新生內(nèi)膜增殖中的調(diào)控作用,為研究CREG防治增生性血管疾病的作用奠定基礎(chǔ).實(shí)驗(yàn)方法(

4、1)建立大鼠頸動(dòng)脈內(nèi)膜球囊損傷動(dòng)物模型,術(shù)后不同時(shí)間點(diǎn)處死大鼠,取損傷區(qū)域的血管段制備標(biāo)本、HE染色,形態(tài)學(xué)觀察.(2)應(yīng)用計(jì)算機(jī)圖像分析,測(cè)算術(shù)后不同時(shí)間點(diǎn)血管腔面積、內(nèi)膜和中膜厚度及面積、以及外彈力膜內(nèi)橫截面積(EEL截面積).(3)采用TRIZOL法提取大鼠頸動(dòng)脈的總RNA,以逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)法,檢測(cè)大鼠頸動(dòng)脈球囊損傷后不同時(shí)間點(diǎn)血管壁中CREG mRNA的動(dòng)態(tài)變化.(4)以免疫組織化學(xué)染色方法,檢測(cè)大鼠頸動(dòng)脈