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文檔簡介
1、GnRH-I(Gonadotrophin releasing hormone,GnRH-I)主動免疫可以用于避孕、終止妊娠、動物去勢等。目前國內(nèi)外學者對GnRH-I主動免疫大動物豬、牛、羊等的研究較多,在小動物貓方面報道較少。本實驗室研制出的GnRH-I試劑已在豬、鼠和犬上做了研究,顯示了很強的免疫作用。本試驗以幼齡家貓為研究對象,探討GnRH-I主動免疫對貓體重、對貓血清GnRH-I抗體水平、睪酮和雌二醇濃度、對貓生殖器官的影響,為該
2、試劑的推廣提供理論依據(jù)。
從市場購買年齡相近(約12周齡),體重接近(1.0~1.2kg),發(fā)育正常的健康家貓雄性、雌性各10只。隨機將雄貓、雌貓分別分成兩組,每組各5只,即對照組(n=5)與免疫組(n=5)。上述貓飼養(yǎng)4周使其適應(yīng)環(huán)境后,即貓16周齡時,進行初次免疫。稱取麥芽糖結(jié)合蛋白—促性腺激素釋放激素六聚體(maltose binding protein-gonadotropin releasing hormone I
3、hexamer,MBP-GnRH-I6)2.5mg或麥芽糖結(jié)合蛋白(maltose binding protein,MBP)2.5mg,將其溶于5mL生理鹽水中,然后用相同體積的Al(OH)3佐劑充分乳化。每只免疫組貓頸部肌肉注射1mL MBP-GnRH-I6,對照組貓頸部肌肉注射1mL MBP。6周后加強免疫,免疫劑量和免疫方式與初次免疫相同。初次免疫前采血和稱重,以后每4周(28天)采血一次,每2周(14天)稱重一次。取得血樣后立即
4、進行離心,3000r/min離心20min,獲得的血清保存在-20℃冰箱中,以備檢測。用ELISA測定血清GnRH-I抗體水平,用放射免疫分析法檢測雄貓的睪酮水平和雌貓的雌二醇濃度。28周齡時,手術(shù)摘除所有試驗貓的生殖器官,稱得睪丸、附睪、卵巢與子宮的重量,并測量睪丸和卵巢大小。4%多聚甲醛固定睪丸、附睪、卵巢、子宮等組織,采用常規(guī)石蠟切片,厚度為5μm,蘇木精-伊紅(HE)染色,光學顯微鏡下進行觀察并拍照,并用Motic Image
5、Plus2.0軟件進行分析,測定100倍鏡下附睪管與40倍鏡下子宮腺體的數(shù)量、子宮粘膜厚度、曲精小管與附睪管的大小。
結(jié)果表明:免疫后,免疫組雄貓和雌貓的體重分別與對照組相比均沒有差異(P>0.05);免疫組雄貓或雌貓的GnRH-I抗體水平均高于對照組(P<0.05);免疫組雄貓血清睪酮水平,睪丸重量、橫徑、縱徑、橫周長、縱周長,附睪重量,附睪管的數(shù)量、縱徑、橫徑、周長、面積顯著低于對照組(P<0.05);免疫組雌貓的血清雌二
6、醇濃度,卵巢重量、橫徑、縱徑、橫周長、縱周長均顯著低于對照組(P<0.05),但免疫組雌貓的子宮重量、子宮腺體數(shù)和子宮內(nèi)膜厚度與對照組相比沒有差異(P>0.05)。組織切片顯示:免疫組雄貓睪丸的曲精小管發(fā)生萎縮,精原細胞分化不明顯;而對照組曲精小管內(nèi)細胞層數(shù)增多,精原細胞逐漸向管腔內(nèi)發(fā)育,分化為初級精母細胞、次級精母細胞、精子細胞和精子。免疫組雄貓附睪未發(fā)現(xiàn)精子,附睪管腔變小,靜纖毛變短;而對照組附睪管中有精子存在,附睪黏膜上皮正常。免
7、疫組雌貓的卵巢卵泡未見明顯生長發(fā)育,含有大量的原始卵泡和初級卵泡,未見次級卵泡;而對照組卵巢皮質(zhì)可見大量的原始卵泡、初級卵泡和次級卵泡。免疫組雌貓子宮內(nèi)膜上皮沒有變化,腺體正常,各層結(jié)構(gòu)清晰,與對照組沒有差異。
根據(jù)以上結(jié)果可以得出結(jié)論:MBP-GnRH-I6主動免疫不影響貓的體重,能升高GnRH-I抗體水平,降低血清睪酮和雌二醇濃度,抑制精子發(fā)生與卵泡發(fā)育,使睪丸、附睪與卵巢萎縮。這表明MBP-GnRH-I6對貓有很強的免疫
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