miRNA--141調(diào)控Tiam1基因在肝癌轉(zhuǎn)移中的作用機(jī)制.pdf

1、南方醫(yī)科大學(xué)2011級(jí)博士學(xué)位論文miIⅢA一141調(diào)控Tiaml基因在肝癌轉(zhuǎn)移中的作用機(jī)制ThemechanismofmiRNA一141regulatesTiamlgeneinhepatocllularcarcinomametastsis課題來源：國(guó)家自然科學(xué)基金(81101822)：廣州市科技計(jì)劃重點(diǎn)項(xiàng)目(11C26090521)學(xué)位申請(qǐng)人導(dǎo)師姓名專業(yè)名稱培養(yǎng)類型培養(yǎng)層次所在學(xué)院劉瑛陳龍華腫瘤學(xué)學(xué)術(shù)型博士研究生第一臨床學(xué)院2014年

2、4月20日廣州摘要們還構(gòu)建了Tiaml的慢病毒干擾載體，包裝慢病毒后感染高轉(zhuǎn)移肝癌細(xì)胞HCCLM6，觀察腫瘤細(xì)胞生物學(xué)特性的變化，發(fā)現(xiàn)Tiaml基因表達(dá)降低后，HCCLM6細(xì)胞增殖速度明顯減慢、S期的比例明顯減少、體外運(yùn)動(dòng)遷移、侵襲能力均明顯降低。上述研究結(jié)果說明，Tiaml是一個(gè)重要的肝癌轉(zhuǎn)移相關(guān)基因。但目前有關(guān)Tiaml在肝癌轉(zhuǎn)移中的表達(dá)調(diào)控機(jī)制尚不清楚。MicroRNA(miRNA)是近年來研究發(fā)現(xiàn)的一類長(zhǎng)約22nt的非編碼單鏈小

3、RNA分子，能以堿基互補(bǔ)形式結(jié)合到靶基因mRNA的3’UTR上，導(dǎo)致靶基因mRNA降解或翻譯抑制，在轉(zhuǎn)錄后水平上對(duì)基因表達(dá)進(jìn)行負(fù)性調(diào)控，研究顯示miRNA可在轉(zhuǎn)錄后水平通過調(diào)控癌基因和／或抑癌基因的表達(dá)廣泛參與腫瘤細(xì)胞增殖、凋亡、分化、侵襲、遷移、血管生成等，與多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后關(guān)系密切。本研究將探討參與調(diào)控Tiaml基因的miRNAs及其在肝癌侵襲、轉(zhuǎn)移中的作用，利用TargetScan、DIANAmicroT矛lmiRand

4、a三個(gè)經(jīng)典的miRNA靶基因預(yù)測(cè)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行相互作用miRNAs的預(yù)測(cè)，得出miR14l和miR106b為候選miRNA；采用RTPCR方法檢測(cè)了miR141、miR一106b和Tiaml蛋白在6種肝癌細(xì)胞株中的表達(dá)趨勢(shì)，初步篩選出miR141為Tiaml相互作用的miRNA；利用熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)驗(yàn)證了miR141與Tiaml的3’UTR區(qū)存在特異性結(jié)合；通過原位雜交技術(shù)檢測(cè)212例有完整隨訪資料的肝癌組織中miR141表達(dá)，結(jié)果顯示mi

5、R141低表達(dá)與患者預(yù)后密切相關(guān)，臨床參數(shù)分析顯示miR141低表達(dá)與轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，單因素和多因素分析顯示miR141低表達(dá)可作為肝癌預(yù)后的預(yù)后因素，提示miR一141可作為肝癌預(yù)后判斷的重要指標(biāo)，對(duì)判斷肝癌預(yù)后有重要意義；通過抑焦JJJmiR141表達(dá)后能上調(diào)低轉(zhuǎn)移潛能的MHCC97L肝癌細(xì)胞Tiaml的表達(dá)，促進(jìn)肝癌細(xì)胞體外增殖、遷移及侵襲能力；轉(zhuǎn)染miR141過表達(dá)病毒后能下調(diào)高轉(zhuǎn)移潛能HCCLM3肝癌細(xì)胞內(nèi)Tiaml的表達(dá)，抑制