外源性miRNA-206在肝癌中的作用及其機制研究.pdf

1、分類號：密級：UDC：學號：406504711022南昌大學碩士研究生學位論文外源性外源性miRNA206在肝癌中的作用及其機制研究在肝癌中的作用及其機制研究StudiesonthefunctionprobableunderlyingmechanismofmiRNA206ectopicoverexpressioninhumanhepatocellularcarcinoma劉偉偉劉偉偉培養(yǎng)單位（院、系）：南昌大學醫(yī)學院指導教師姓名、職稱：

2、萬福生教授申請學位的學科門類：理學學科專業(yè)名稱：生物化學與分子生物學論文答辯日期：2014年月日答辯委員會主席：評閱人：2014年月摘要II摘要micrNA206(miR206)是肌源性miRNAs（myomiRs）miR1家族中的一員，早期的研究表明miR206作為肌特異性miRNA參與肌肉的生成。然而，近些年的研究表明miR206與多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關，主要參與細胞生長、增殖、凋亡以及細胞遷移等的調(diào)控，可作為一種腫瘤抑制基因。

3、有研究表明miR206可靶向作用于Notch3是其抑制腫瘤發(fā)生發(fā)展的重要機制之一。目的：目的：從分子和細胞水平探討miR206在肝癌中的作用及其部分的分子機制，旨在為腫瘤的基因治療進行一些有益的嘗試并提供有參考意義的實驗數(shù)據(jù)。方法：方法：1、利用免疫組織化學技術初步檢測Notch3在肝癌及其癌旁的相對表達情況。2、高表達miR206對人肝癌細胞HepG2作用的體外實驗研究脂質體介導將miRNA206mimic轉染人肝癌HepG2細胞，分

4、別應用MTS檢測細胞增殖活性，Hoechst33342染色和AnnexinVFITCPIassay檢測細胞凋亡、流式分析檢測細胞周期分布，傷口愈合實驗觀察細胞遷移情況。利用RTqPCR分析miRNA206、Notch3、Bax、Bcl2、Hes1、P57和MMP9基因表達水平，利用Westernblotting分析Notch3、Bax、Bcl2、Caspase3、Hes1、P57和MMP9的蛋白表達水平。結果：結果：1、高表達miR20

5、6可以抑制人肝癌HepG2細胞增殖和促進人肝癌HepG2細胞凋亡；2、高表達miR206可誘導人肝癌HepG2細胞周期阻滯和抑制細胞遷移；3、miR206mimic被成功的轉染到HepG2細胞后，Notch3、Hes1、Bcl2和MMP9的mRNA和蛋白水平顯著下調(diào)而P57和Bax被上調(diào)?；罨偷腃aspase3蛋白表達水平也明顯上調(diào)4、Notch3在肝癌癌旁組織呈微弱的低表達，而在癌組織呈強陽性表達5、miR206在體外抑制肝癌細胞的