miRNA-100在淮安地區(qū)食管鱗狀細胞癌中的表達及其作用機制研究.pdf

1、目的：探討江蘇淮安地區(qū)食管鱗狀細胞癌（esophageal squamous cell carcinoma, ESCC）中miRNA-100的表達特征及其相關機制。
　　方法：采用Microarray流體芯片技術及熒光定量聚合酶鏈反應（quantitatie realtime Polymerase Chain Reaction，qPCR）技術檢測ESCC癌組織及癌旁組織中miRNA-100表達；采用劃痕實驗、Transwell實驗

2、觀察miRNA-100過表達/沉默后分別對ESCC細胞遷移、侵襲的影響；采用CCK8實驗觀察miRNA-100過表達/沉默后對ESCC細胞增殖的影響；采用流式細胞術觀察miRNA-100過表達/沉默后對ESCC細胞凋亡的影響；通過miRBase、NCBI、UCSC Browser等在線工具分析miRNA-100序列特征；應用miRanda、TargetScan及PicTar預測miRNA-100的靶基因，并結合已證實的靶標基因，進行功能

3、富集分析（Gene Ontology）和信號通路富集分析（Pathway Enrichment）；通過雙熒光素酶報告系統(tǒng)檢測mTOR是否為miRNA-100的下游直接靶基因，進一步采用Western Blot技術檢測miRNA-100過表達/沉默后ESCC細胞中mTOR（mammalian target of rapamycin）蛋白表達水平進行驗證。
　　結果：⑴流體芯片技術及qRT-PCR技術檢測的結果均表明：淮安地區(qū)ESCC

4、癌組織中miRNA-100表達水平顯著低于癌旁組織（P<0.05）；⑵伴淋巴結轉移組ESCC癌組織miRNA-100表達水平明顯低于無淋巴結轉移組癌組織（P<0.05）；⑶miRNA-100過表達可以明顯抑制ESCC細胞遷移和侵襲，而miRNA-100沉默則對ESCC細胞遷移和侵襲具有促進作用；⑷miRNA-100過表達/沉默對ESCC細胞增殖和凋亡均無明顯影響（P>0.05）；⑸miRNA-100在各物種之間具有高度保守性，其靶基因功

5、能分別富集于基因沉默、染色體沉默、細胞生物合成的負性調節(jié)等生物學過程（P<0.001），涉及腫瘤信號通路、溶酶體信號通路、凋亡信號通路等信號轉導通路（P<0.05）；⑹雙熒光素酶報告系統(tǒng)及其Western Blot進一步檢測的結果均表明：mTOR為miRNA-100的直接靶基因。
　　結論：①淮安地區(qū)ESCC癌組織中miRNA-100表達水平顯著低于癌旁組織，且與腫瘤的轉移密切相關；②miRNA-100可能通過調控mTOR蛋白表達