牛血清白蛋白-高分子結(jié)合體的制備及在腫瘤診療中的應(yīng)用.pdf

1、近年來(lái)，血清白蛋白作為一種新型的生物材料，因其良好的生物相容性、精確的幾何結(jié)構(gòu)，且易于功能化，在納米醫(yī)藥領(lǐng)域受到越來(lái)越多的關(guān)注。本文選用牛血清白蛋白(BSA)作為基材，從分子設(shè)計(jì)角度，制備出一種新型的蛋白質(zhì)-高分子結(jié)合體，并對(duì)其自組裝行為及在癌癥化療、核素治療和熒光成像中的應(yīng)用進(jìn)行了研究。具體研究?jī)?nèi)容如下：
　?。?）雙親性BSA-聚己內(nèi)酯(PCL)結(jié)合體的合成與結(jié)構(gòu)性能表征。本文通過(guò)開(kāi)環(huán)聚合(ROP)，合成了端基馬來(lái)酰亞胺化的P

2、CL，并利用馬來(lái)酰亞胺與BSA的自由巰基之間的邁克爾加成反應(yīng)，制備出新型BSA-PCL結(jié)合體。通過(guò)核磁共振儀、基質(zhì)輔助激光解吸附串聯(lián)時(shí)間飛行質(zhì)譜儀(MALDI-TOF MS)和SDS-PAGE凝膠電泳等對(duì)合成產(chǎn)物進(jìn)行表征，并利用透射電子顯微鏡(TEM)和動(dòng)態(tài)光散射(DLS)等進(jìn)一步研究了該結(jié)合體的組裝性能。結(jié)果顯示，BSA-PCL結(jié)合體被成功制備，且具有雙親性，在水中可以組裝得到不同形貌的納米組裝體。
　?。?）基于BSA-PCL

3、結(jié)合體的納米靶向藥物載體的構(gòu)建。利用制備的雙親性BSA-PCL結(jié)合體，通過(guò)自組裝技術(shù)，構(gòu)建了包載抗癌藥物阿霉素的納米高分子脂質(zhì)體，并利用表面含有的功能基團(tuán)，對(duì)高分子脂質(zhì)體進(jìn)行表面靶向修飾。采用U251細(xì)胞和MAD-MB-231細(xì)胞對(duì)構(gòu)建的納米載體的細(xì)胞內(nèi)吞和細(xì)胞毒性進(jìn)行了評(píng)估。結(jié)果表明，相比于未修飾的高分子脂質(zhì)體，經(jīng)西妥昔單抗修飾的高分子脂質(zhì)體具有更好的進(jìn)胞效果。MTT結(jié)果表明，制備的BSA-PCL結(jié)合體具有很低的細(xì)胞毒性和較好的生物相

4、容性。包載抗癌藥物阿霉素后，西妥昔單抗修飾的載藥BSA-PCL結(jié)合體納米粒子對(duì)兩種腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)都具有明顯的抑制效果。
　　（3）基于BSA-PCL結(jié)合體的核素靶向納米載體的構(gòu)建。利用BSA含有的酪氨酸作為位點(diǎn)，在BSA-PCL結(jié)合體制備的納米組裝體上標(biāo)記放射性131I，并對(duì)納米載體進(jìn)行靶向修飾，提高放射性131I標(biāo)記的納米粒子對(duì)細(xì)胞的靶向性。采用γ計(jì)數(shù)器和MTT實(shí)驗(yàn)對(duì)構(gòu)建的核素靶向納米載體的進(jìn)胞效果和腫瘤抑制生長(zhǎng)效果進(jìn)行了表征。

5、結(jié)果顯示，相比于游離的131I離子，構(gòu)建的核素靶向納米載體增加了放射性131I被腫瘤細(xì)胞的攝取量，延長(zhǎng)了放射性131I在腫瘤細(xì)胞內(nèi)的存留時(shí)間，提高了對(duì)腫瘤細(xì)胞的放射性殺傷效果。
　?。?）基于BSA-PCL結(jié)合體的近紅外熒光納米探針的構(gòu)建。利用雙親性BSA-PCL結(jié)合體對(duì)疏水性近紅外CuInS2/ZnS量子點(diǎn)進(jìn)行表面改性，制備出新型的近紅外熒光納米探針。利用TEM、DLS、熒光分光光度計(jì)和紫外分光光度計(jì)對(duì)構(gòu)建的納米探針的形貌、粒徑

6、和熒光性能進(jìn)行了表征。該納米探針具有優(yōu)異的熒光性能和膠體穩(wěn)定性，同時(shí)由于最外層BSA的保護(hù)，有效地降低了納米探針的非特異性吸附，并賦予納米探針良好的生物相容性。將靶向制劑cRGD修飾到納米探針的表面，有效增加了納米探針對(duì)αvβ3整合素過(guò)表達(dá)的腫瘤細(xì)胞的靶向性。此外，在裸鼠體內(nèi)初步驗(yàn)證了該納米探針在體內(nèi)成像的可行性。以上結(jié)果為進(jìn)一步構(gòu)建體內(nèi)靶向的近紅外熒光納米探針打下了基礎(chǔ)。
　　（5） pH響應(yīng)性 BSA-聚甲基丙烯酸二異丙基氨基

7、乙酯(PDPA)結(jié)合體的制備。將刺激響應(yīng)性高分子連接到蛋白質(zhì)上，可賦予蛋白質(zhì)-高分子結(jié)合體敏感性。本文首先設(shè)計(jì)合成一種ATRP小分子引發(fā)劑，通過(guò)ATRP聚合，制備端基馬來(lái)酰亞胺化的pH敏感高分子PDPA。利用BSA中的巰基，將PDPA連接到BSA上，制備了BSA-PDPA結(jié)合體。利用SDS-PAGE凝膠電泳對(duì)結(jié)合體進(jìn)行分子量表征，證明PDPA被成功結(jié)合到BSA上。通過(guò)ZetaPALS電位分析儀測(cè)定BSA-PDPA結(jié)合體在不同pH值溶液中