早產(chǎn)兒視網(wǎng)膜?。≧OP）動(dòng)物模型的建立及臨床分析.pdf

1、早產(chǎn)兒視網(wǎng)膜病變(retinopathyofprematurity，ROP)是早產(chǎn)兒和低體重兒發(fā)生的一種視網(wǎng)膜血管增生性病變，近年來(lái)隨著我國(guó)醫(yī)療條件和水平的提高，早產(chǎn)兒的存活率不斷提高，同時(shí)ROP的發(fā)生率也相應(yīng)的增加。目前在世界范圍內(nèi)早產(chǎn)兒視網(wǎng)膜病變已成為使小兒失明的主要原因，占兒童致盲原因的6％-18％，故引起國(guó)內(nèi)外學(xué)者及社會(huì)的廣泛關(guān)注。ROP的病因是多因素的，其中以低出生體重、低胎齡為最主要因素。目前ROP真正的發(fā)病機(jī)制仍未完全明確

2、。因此，研究ROP的危險(xiǎn)因素及發(fā)病機(jī)制從而達(dá)到早期干預(yù)，對(duì)降低ROP的發(fā)生率和致盲率有著極其重要意義。本研究通過(guò)對(duì)小鼠氧干預(yù)后引發(fā)氧誘導(dǎo)視網(wǎng)膜病變(oxygen-inducedretinopathy，OIR)，模擬人類早產(chǎn)兒視網(wǎng)膜病變，并可通過(guò)此模型進(jìn)一步了解ROP的發(fā)病機(jī)制。 第一部分：早產(chǎn)兒視網(wǎng)膜病(ROP)動(dòng)物模型的建立 目的：通過(guò)氧環(huán)境的改變誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生視網(wǎng)膜新生血管(OIR)，模擬人類早產(chǎn)兒視網(wǎng)膜病變，建立早產(chǎn)

3、兒視網(wǎng)膜病(ROP)的動(dòng)物模型，為研究該病的發(fā)病機(jī)制及治療提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。 方法： 1.模型制作：將7日齡C57BL/6J幼鼠放入75％濃度的高氧狀態(tài)下飼養(yǎng)5天，隨后在正常氧環(huán)境下飼養(yǎng)5天，作為ROP模型組：同齡C57BL/6J幼鼠作為正常對(duì)照組。 2.視網(wǎng)膜鋪片制作方法的比較：目前視網(wǎng)膜鋪片的制作方法主要有三種：(1)墨汁灌注法(2)高分子量熒光素一右旋糖苷(分子量為2×106)灌注法(3)ADP酶組織化學(xué)法。預(yù)

4、實(shí)驗(yàn)中均比較了上述方法的優(yōu)缺點(diǎn)。 3.小鼠視網(wǎng)膜新生血管熒光素灌注造影：在出生后12，17天(P12，17)，給已氧誘導(dǎo)視網(wǎng)膜病變模型小鼠的心臟灌注相對(duì)高分子量的熒光素，眼球經(jīng)過(guò)組織固定后，通過(guò)顯微手術(shù)鏡游離視網(wǎng)膜并鋪片，在熒光顯微鏡下觀察視網(wǎng)膜血管的分布與形態(tài)。 4.視網(wǎng)膜新生血管量化：生后12，17天(P12，17)處死小鼠，組織切片方法觀察各組視網(wǎng)膜血管的變化，計(jì)數(shù)突破內(nèi)界膜的血管內(nèi)皮細(xì)胞核以量化氧誘導(dǎo)視網(wǎng)膜病變新

5、生血管的程度。 結(jié)果： 1.C57BL/6J幼鼠經(jīng)氧誘導(dǎo)之后，可產(chǎn)生連續(xù)的視網(wǎng)膜新生血管改變，并且有很好的重復(fù)性。 2.三種視網(wǎng)膜鋪片制作方法的比較發(fā)現(xiàn)采用較高相對(duì)分子質(zhì)量的熒光素進(jìn)行視網(wǎng)膜血管造影，方法簡(jiǎn)便、快捷，重復(fù)性好，血管顯影清晰、安全。 3.在熒光顯微鏡下可以清楚地觀察整個(gè)視網(wǎng)膜血管形態(tài)走行；通過(guò)調(diào)節(jié)焦點(diǎn)視網(wǎng)膜淺層、深層以及二者交通支都清晰顯影。高氧誘導(dǎo)的視網(wǎng)膜新生血管主要發(fā)生在視網(wǎng)膜有血管區(qū)與

6、無(wú)血管區(qū)的交界部位，可見(jiàn)滲出、出血、微血管瘤的表現(xiàn)，并可清楚反映隨時(shí)間延長(zhǎng)發(fā)生的血管改變。 4.組織切片顯示OIR模型在不同時(shí)間點(diǎn)突破內(nèi)界膜(interna1.1imitingmembrane，ILM)的血管內(nèi)皮細(xì)胞數(shù)逐漸增多。 結(jié)論： 1.暴露在高氧環(huán)境的C57BL/6J幼鼠經(jīng)過(guò)相對(duì)低氧后，100％產(chǎn)生視網(wǎng)膜新生血管的改變，形成的ROP模型可以模擬人類早產(chǎn)兒視網(wǎng)膜病變。 2.通過(guò)高分子量熒光素灌注造影可

7、以清晰、準(zhǔn)確的動(dòng)態(tài)了解視網(wǎng)膜新生血管模型小鼠眼底血管的病變部位及形態(tài)學(xué)改變?？梢暂^好地應(yīng)用于視網(wǎng)膜新生血管性疾病的基礎(chǔ)研究。 3.視網(wǎng)膜血管熒光素灌注以及組織切片方法均顯示：隨著時(shí)間的延續(xù)，ROP模型的視網(wǎng)膜新生血管逐漸增多，病變程度有加重趨勢(shì)。 第二部分：早產(chǎn)兒視網(wǎng)膜病篩查及高危因素分析 目的：了解我國(guó)早產(chǎn)兒視網(wǎng)膜病變(retinopathyofprematurity，ROP)防治指南出臺(tái)后，溫州育英兒童醫(yī)院新

8、生兒監(jiān)護(hù)病房(NICU)中ROP的發(fā)病率和全身高危因素。 方法：對(duì)2007年1月1日至2007年12月31日在溫州育英兒童醫(yī)院新生兒監(jiān)護(hù)病房(NICU)住院的體重≤2000g的早產(chǎn)兒進(jìn)行ROP篩查，同時(shí)對(duì)其全身的情況進(jìn)行分析，分析ROP發(fā)生的高危因素。 結(jié)果：在我院NICU住院符合篩查標(biāo)準(zhǔn)并完成ROP篩查的患兒有254例，發(fā)現(xiàn)ROP患兒發(fā)病率為9.4％，出生體重在1600g前后的早產(chǎn)兒ROP發(fā)生率比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0

9、.05)，發(fā)生Ⅰ期ROP18例，Ⅱ期ROP4例，Ⅲ期及以上ROP1例：激光治療2例，無(wú)失明病例。通過(guò)logistic多因素逐步回歸分析，發(fā)現(xiàn)ROP的危險(xiǎn)因素與孕周、出生體重、吸氧時(shí)間、機(jī)械通氣、呼吸窘迫綜合癥、輸血密切相關(guān)。 結(jié)論：ROP防治指南出臺(tái)后，溫州育英兒童醫(yī)院NICU中ROP發(fā)生率9.4％。我們推薦ROP篩查標(biāo)準(zhǔn)是≤1600g的早產(chǎn)兒，對(duì)于＞1600g的早產(chǎn)兒，我們要根據(jù)患兒全身疾病情況有選擇性的進(jìn)行篩查。低胎齡、低出