武漢地區(qū)流感樣病例中人鼻病毒和人腸道病毒的分子流行病學(xué)研究.pdf

1、目的:
　　應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR及RT-PCR法對(duì)武漢地區(qū)類流感樣監(jiān)測(cè)病例的咽拭子標(biāo)本進(jìn)行人鼻病毒(human rhinovirus,HRV)和人腸道病毒(human Enterovirus,HEV)的檢測(cè)和分型,了解人鼻病毒/人腸道病毒(HRV/HEV)在武漢地區(qū)的感染現(xiàn)狀、亞型構(gòu)成、分子進(jìn)化,以及年齡、季節(jié)分布等流行情況,揭示和闡明人鼻病毒、人腸道病毒的流行特點(diǎn)及規(guī)律,為人鼻病毒、人腸道病毒等相關(guān)呼吸道感染的防控、臨床診斷與

2、治療、疫苗的研發(fā)提供理論依據(jù)。
　　研究對(duì)象及方法:
　　1.收集武漢地區(qū)2007年7月至2011年12月期間,武漢市一醫(yī)院和武漢市兒童醫(yī)院門(mén)診流感樣病例(體溫≥38℃,同時(shí)伴有咳速或咽痛之一者)的咽拭子標(biāo)本共計(jì)4065份。
　　2.收集咽拭子標(biāo)本后低溫運(yùn)送至武漢市疾病預(yù)防控制中心病毒科。咽拭子標(biāo)本經(jīng)核酸提取后,采用HRV、HEV通用引物及探針和實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)HRV/HEV;同時(shí)每份標(biāo)本采用PCR及RT-PC

3、R法檢測(cè)A型和B型副流感病毒(IFV(A和B型))、人偏肺病毒(HMPV)、呼吸道合胞病毒(RSV)、偏肺病毒(PIV(1、2、3))、冠狀病毒(HCoV(HKU1和NL63型))、腺病毒(AdV)及人博卡病毒(HboV)。隨機(jī)選取50例HRV/HEV檢測(cè)陽(yáng)性樣本,應(yīng)用HRV、HEV分型引物,對(duì)VP4/VP2區(qū)段進(jìn)行RT-PCR擴(kuò)增,并對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序,所得測(cè)序結(jié)果與美國(guó)國(guó)立生物技術(shù)中心(NCBI)Genebank中的序列進(jìn)行BLAS

4、T比較分析。利用MEGA5.1軟件中的鄰接法進(jìn)行系統(tǒng)進(jìn)化分析。
　　結(jié)果:
　　在4065份流感樣病例的咽拭子標(biāo)本中共檢出HRV/HEV陽(yáng)性標(biāo)本170例,總檢出率為4.18％,其中23例陽(yáng)性標(biāo)本存在與其它呼吸道病毒的混合感染(23/170,13.5%)。在混合感染病例中,33.3%(8/24)的病例混合感染腺病毒(AdV),20.8%(5/24)的病例混合感染冠狀病毒(HCoV),16.7%(4/24)的病例混合感染副流感病

5、毒(PIV),8.3%(2/24)的病例混合感染人偏肺病毒(HMPV),8.3%(2/24)的病例混合感染博卡病毒(HBoV),4.2%(1/24)的病例混合感染甲型H1N1流感病毒,4.2%(1/24)的病例混合感染乙型流感病毒。各年齡組HRV/HEV感染者中,0-3歲、4-14歲、15-25歲、26-65歲及>65歲年齡組的檢出率分別為7.0%(117/1662)、4.5%(43/948)、0.5%(5/930)、1.1%(5/47

6、7)和0.0%(0/48),3歲以下(包括3歲)兒童陽(yáng)性率明顯高于3歲以上年齡組(χ2=57.300,P=0.000)。2008年7月-2011年12月檢測(cè)結(jié)果顯示,HRV/HEV在武漢地區(qū)流行呈現(xiàn)明顯的季節(jié)性,以春夏兩季為高發(fā)季節(jié)。
　　50例HRV/HEV通用引物檢測(cè)陽(yáng)性的標(biāo)本中34例分型成功。其中,9例為HRV單獨(dú)感染,23例為HEV單獨(dú)感染,2例為HRV和HEV混合感染。11例HRV感染者中6例為HRV-A(54.5%),

7、2例為HRV-B(18.2%),3例為HRV-C(27.3%);25例HEV感染者中10例為HEV-A(40%),15例為HEV-B(60%)。系統(tǒng)進(jìn)化分析發(fā)現(xiàn),武漢地區(qū)流行的HRV、HEV與其對(duì)應(yīng)的參考株在進(jìn)化上十分接近,但武漢流行株也表現(xiàn)出了基因變異和遺傳分化的跡象。
　　結(jié)論:
　　HRV/HEV的檢出率較高,是引起武漢地區(qū)人群急性呼吸道感染的一個(gè)重要病因。不同年齡組HRV/HEV感染率不同,其中3歲及3歲以下兒童為易