應用超聲微泡靶向遞送aFGF改善糖尿病心肌病心肌微循環(huán)的初步實驗研究.pdf

1、本研究分為二部分：
　　研究一:實時心肌超聲造影評價糖尿病早期心肌血流灌注改變的實驗研究
　　目的：
　　微血管病變是糖尿病(Diabetes Mellitus，DM)的特征性病變之一，可導致心肌微循環(huán)異常。本研究應用實時心肌超聲造影(real-time Myocardial contrastechocardiography，RT-MCE)技術對DM早期大鼠心肌血流灌注進行定量評價，探討該技術檢測DM早期大鼠心肌微循環(huán)

2、異常的應用價值。
　　方法：
　　24只雄性SD大鼠中隨機選取12只通過腹腔注射鏈脲佐菌素建立DM模型（DM組），剩余12只大鼠作為正常對照組，腹腔注射等量檸檬酸緩沖液。模型建成8周后，在靜息狀態(tài)下，對兩組大鼠進行RT-MCE檢查，檢測乳頭肌水平左室壁感興趣區(qū)的峰值聲學強度(A)以及造影劑的灌注速率(β)，并計算出心肌血流量(A×β)。RT-MCE檢查結束后，處死大鼠取相應部位的心肌組織，行CD31免疫組織化學染色檢測心肌微

3、血管密度(Myocardial MicrovascularDensity，MVD)，應用透射電鏡觀察心肌細胞超微結構的改變，并分析DM組大鼠心肌A與MVD的相關性。
　　結果：
　　靜息狀態(tài)下，DM組大鼠心肌A及A×β較正常對照組明顯減低，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)，β較對照組減低，但差別無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。DM組的MVD測值較正常對照組明顯減低(P＜0.01)。DM組A及MVD呈線性正相關(r=0.903

4、，P＜0.01)。電鏡檢查可見DM組心肌超微結構發(fā)生改變，主要表現(xiàn)為肌絲之間排列紊亂，線粒體腫脹等。
　　結論：
　　DM早期大鼠即可出現(xiàn)心肌微循環(huán)異常，表現(xiàn)為心肌造影峰值聲學強度減低，RT-MCE在檢測DM早期心肌血流灌注異常方面具有重要的應用價值。
　　研究二：應用超聲微泡靶向遞送aFGF改善糖尿病心肌病大鼠心肌微循環(huán)的初步研究
　　目的：
　　糖尿病心肌病(Diabetic Cardiomyopath

5、y, DCM)是DM的嚴重并發(fā)癥之一，目前臨床尚缺乏有效治療方法。本研究擬構建攜載酸性成纖維細胞生長因子（acid fibroblast growth factor，aFGF）的超聲微泡(SonoVue-aFGF)，并結合超聲靶向微泡擊破（Ultrasound-targeted Microbubble Destruction，UTMD）技術對DCM早期大鼠進行干預，應用RT-MCE技術對該方法改善DCM心肌微循環(huán)的作用進行定量評價，旨在

6、為今后DCM的治療提供一種新的方法。
　　方法：
　　52只健康雄性SD大鼠隨機挑選40只大鼠腹腔注射鏈脲佐菌素(Streptozocin，STZ)建立DCM模型，其余12只作為正常對照組。將DCM大鼠隨機分為DCM模型組、單純aFGF溶液組及SonoVue-aFGF+超聲輻照組。單純aFGF溶液組僅經(jīng)尾靜脈注射aFGF溶液，SonoVue-aFGF+超聲輻照組經(jīng)尾靜脈注射SonoVue-aFGF溶液并同時給予心肌超聲照射，

7、DCM模型組及正常對照組不作任何處理。實驗干預前及干預后4周所有大鼠均進行常規(guī)超聲心動圖和RT-MCE檢查，常規(guī)超聲心動圖測定左心室射血分數(shù)(Left Ventricular Fjection Fraction,LVEF)以及左心室短軸縮短率（Left Ventricular Fraction Shortening, LVFS），RT-MCE測定乳頭肌水平左室短軸觀左心室前壁峰值聲學強度(A)、造影劑灌注速率(β)并計算出心肌血流量（A

8、×β）;處死大鼠后取相應部位的心肌組織，行CD31免疫組織化學染色觀察心肌微血管分布情況并檢測MVD，透射電鏡觀察心肌細胞超微結構的改變。
　　結果：
　　1、干預前，DCM模型組、單純aFGF溶液組及SonoVue-aFGF+超聲輻照組大鼠LVEF、LVFS均明顯低于正常對照組(P＜0.01);干預后4周，單純aFGF溶液組及SonoVue-aFGF+超聲輻照組大鼠LVEF、LVFS較同期DCM模型組略有增高，但差異均無統(tǒng)

9、計學意義(P＞0.05)。
　　2、干預后4周，SonoVue-aFGF+超聲輻照組A及A×β均較同期DCM模型組明顯增高(P＜0.01)，β較DCM模型組略有增高(P＞0.05)，單純aFGF溶液組各指標較同期DCM模型組增高不明顯(P＞0.05); DCM模型組、單純aFGF溶液組A、β及A×β均明顯低于正常對照組（P＜0.01）。
　　與同組干預前比較，干預后4周SonoVue-aFGF+超聲輻照組A及A×β明顯增高(

10、P＜0.05)，而DCM模型組A及A×β明顯減低(P＜0.05)。
　　3、CD31免疫組織化學染色結果顯示DCM模型組MVD值較同期正常對照組明顯減低(P＜0.01)，SonoVue-aFGF+超聲輻照組較DCM模型組明顯增加(P＜0.01)，單純aFGF溶液組較同期DCM模型組略有增加（P＞0.05）。透射電鏡結果顯示SonoVue-aFGF+超聲輻照組的心肌超微結構較同期DCM模型組明顯改善。
　　結論：
　　1