系統(tǒng)性紅斑狼瘡NET線粒體DNA的致病機(jī)制及其臨床干預(yù)研究.pdf

1、第一部分NET線粒體DNA及其抗體誘導(dǎo)系統(tǒng)性紅斑狼瘡pDC-IFNα通路的活化
　　目的:探討中性粒細(xì)胞胞外網(wǎng)絡(luò)（NET）中的線粒體DNA（mtDNA）及抗mtDNA抗體與系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）的I型干擾素活化機(jī)制。
　　方法:102名SLE患者、14名類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（RA）患者和40名健康對照納入本實(shí)驗(yàn)。分離外周血中性粒細(xì)胞，PMA刺激后熒光染色觀察NET生成；并對狼瘡性腎炎（LN）腎組織標(biāo)本原位NET染色。實(shí)時定量聚合酶

2、鏈反應(yīng)（PCR）檢測NET中mtDNA含量及外周血單個核細(xì)胞5個Ⅰ型干擾素（IFN）誘導(dǎo)基因(OAS-1、Mx-1、Ly6e、IFITl和IFIT4)的mRNA水平。建立酶聯(lián)免疫吸附法檢測SLE患者、RA患者和健康對照血漿抗 mtDNA抗體的滴度及。在純化的漿細(xì)胞樣樹突狀細(xì)胞（pDC）培養(yǎng)體系中加入分離出的NET、mtDNA及雙鏈DNA（dsDNA）、抗 mtDNA-IgG及抗 dsDNA-IgG和其它刺激條件，收集細(xì)胞上清并檢測 IF

3、N-α的含量。
　　結(jié)果：NET中mtDNA的含量在SLE患者中顯著增高，并與SLE疾病活動指數(shù)（SLEDAI）及IFN積分呈顯著正相關(guān)。SLE患者血漿抗mtDNA抗體水平顯著高于RA組和健康對照組，并與抗雙鏈DNA抗體、SLE疾病活動指數(shù)（SLEDAI）及 IFN積分呈顯著正相關(guān)?？?mtDNA抗體水平與狼瘡腎炎的發(fā)生顯著相關(guān)。mtDNA/抗mtDNA-IgG較dsDNA/抗dsDNA抗體具有更強(qiáng)的通過TLR-9受體激活pDC釋

4、放IFN-α的能力。
　　結(jié)論:NET線粒體DNA及其抗體是反映SLE疾病活動、并與活動性LN相關(guān)的新的生物標(biāo)志物，NET-mtDNA/mtDNA抗體參與了SLE的Ⅰ型干擾素通路活化。
　　第二部分二甲雙胍下調(diào)NET-pDC-IFNα通路及其在系統(tǒng)性紅斑狼瘡中的治療效應(yīng)——a proof of concept trial
　　目的:探討二甲雙胍下調(diào)NET-pDC-IFN活化的效應(yīng)，以及應(yīng)用于常規(guī)服用糖皮質(zhì)激素和傳統(tǒng)免疫

5、抑制劑背景下的輕中度活動性SLE患者中的有效性和安全性。
　　方法:體外實(shí)驗(yàn)采用Quant-iT? PicoGreenRdsDNA kit定量NET，在純化的漿細(xì)胞樣樹突狀細(xì)胞（pDC）培養(yǎng)體系中加入不同濃度的二甲雙胍和其它刺激條件，收集細(xì)胞上清、采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測IFN-α的含量。臨床試驗(yàn)：124名SLE患者以隨機(jī)數(shù)字法隨機(jī)分為2組，62例為二甲雙胍聯(lián)合常規(guī)治療（Met組），62例為常規(guī)治療（對照組）。Met組給予二甲雙胍0

6、.5-2.0g/d，治療6個月，對照組不干預(yù)常規(guī)隨訪。分別于入組前進(jìn)行基線評估及入組后每月評估二甲雙胍減少疾病活動（SELENA-SLEDAI Flare Index[SFI]）發(fā)生，減少激素使用量以及減輕體重指數(shù)（BMI）的效應(yīng)。
　　結(jié)果:二甲雙胍呈現(xiàn)劑量依賴的方式抑制PMA刺激的NET生成及漿細(xì)胞樣樹突狀細(xì)胞Toll樣受體9介導(dǎo)的IFNα分泌。隨機(jī)對照臨床試驗(yàn)共109名SLE患者完成觀察（Met組54名，對照組55名）。與對

7、照組相比，Met組減少激素使用量的效應(yīng)更顯著（4個月P=0.0806，5個月P=0.0307，6個月P=0.0482）。激素減量大于基線50％的患者數(shù)在Met組為22（40%），對照組為13（24%）（P=0.058）。體重下降或維持不變的患者數(shù)在二甲雙胍組為32（59%），對照組為15（27%）（P<0.001）。出現(xiàn)疾病活動的患者數(shù)在二甲雙胍組為7（13%），對照組為11（20%），兩組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論:二甲雙胍能