系統(tǒng)性紅斑狼瘡相關(guān)基因的致病機(jī)理研究.pdf

1、目的：系統(tǒng)性紅斑狼瘡（Systemic Lupus Erythematosus,SLE)是一種病因復(fù)雜、并能累積多器官的系統(tǒng)性自身免疫疾病，其發(fā)病與Ⅰ型干擾素（Interferon,IFN)通路過度活化關(guān)系密切。本研究意在探討在SLE患者外周血以及狼瘡腎炎腎臟中嘌呤核苷磷酸化酶(purine nucleoside phos-phorylasc，PNP),普列克底物蛋白同源域F家族成員2(pleckstrin homology domai

2、n containing family F member 2，PLEKHF2)和錨定蛋白結(jié)構(gòu)域44(ankyrin repeat domain44,ANKRD44)三個(gè)SLE相關(guān)易感基因的表達(dá)情況及其與IFN積分的相關(guān)性，并進(jìn)一步探討ANKRD44在干擾素通路中調(diào)控的分子機(jī)制。
　　方法：收集診斷明確的42例系統(tǒng)性紅斑狼瘡患患者和48例正常對照者外周血以及12例狼瘡腎炎患者腎穿樣本和10例腎癌患者癌旁正常腎臟樣本，釆用實(shí)時(shí)熒光定量

3、聚合酶鏈反應(yīng)（Real-time polymerase chain reaction,Real-time PCR)技術(shù)檢測PNP、PLEKHF2和ANKRD44的表達(dá)，并分析它們與SLE臨床特征和IFN積分的相關(guān)性。并挑選了基因ANKRD44做了進(jìn)一步的深入研究，檢測了在Raw264.7細(xì)胞在IFN-α刺激之后的表達(dá)動(dòng)力學(xué)，并在Raw264.7細(xì)胞中轉(zhuǎn)染了針對ANKRD44的siRNA,用Real-timc PCR檢測干擾素誘導(dǎo)基因(I

4、FN-inducible genes,IFIG)的表達(dá)，并用蛋白免疫印跡western blotting的方法檢測干擾素下游通路的激活情況。
　　結(jié)果：與正常人的外周血單個(gè)核細(xì)胞(peripheral blood mononuclear cell，PBMC)相比，狼瘡病人PBMC中PNP、PLEKHF2和ANKRD44的表達(dá)水平都顯著性降低。同時(shí)與正常腎臟組織相比，狼瘡腎炎腎臟中PNP和ANKRD44表達(dá)水平顯著性降低，而PLEK

5、HF2表達(dá)水平上調(diào)。通過干擾素積分相關(guān)性分析，我們發(fā)現(xiàn)，狼瘡腎炎患者腎臟PNP的表達(dá)水平與干擾素積分成負(fù)相關(guān)，而狼瘡PBMC樣本中ANKRD44的表達(dá)水平也與干擾素積分負(fù)相關(guān)。這提示,PNP和ANKRD44可能參與Ⅰ型干擾素通路的調(diào)節(jié)。進(jìn)一步對ANKRD44的功能研究發(fā)現(xiàn)，ANKRD44本身就能被IFN-α下調(diào)，并且能夠抑制干擾素下游信號通路和干擾素誘導(dǎo)基因的表達(dá)。
　　結(jié)論：狼瘡患者中異常表達(dá)的PNP，并與IFN-α相關(guān)，可以作