SREBP1在奶牛乳腺上皮細(xì)胞乳脂合成中的功能研究.pdf

1、固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白(sterol regulatory element-binding proteins，SREBPs)屬于核轉(zhuǎn)錄因子家族，激活膽固醇和脂類合成與轉(zhuǎn)運(yùn)的相關(guān)基因，對(duì)維持體內(nèi)的脂類平衡至關(guān)重要。迄今為止，對(duì)于奶牛乳腺上皮細(xì)胞中SREBPs或其他核轉(zhuǎn)錄因子如PPARγ(Peroxisomeproliferator-activated receptor gamma)哪個(gè)才是最重要的調(diào)節(jié)子仍有爭(zhēng)論。mTOR(themammal

2、ian target of rapamycin)是蛋白合成和細(xì)胞增殖的關(guān)鍵調(diào)節(jié)子，最近研究表明mTORC1能夠調(diào)節(jié)SREBP1促進(jìn)脂類合成。然而，SREBP1對(duì)mTOR在乳脂合成中的影響至今沒有相關(guān)報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)旨在確定奶牛乳腺上皮細(xì)胞SREBP1在乳脂合成中的作用及SREBP1對(duì)mTOR表達(dá)影響。
　　通過研究SREBP1基因過表達(dá)和基因沉寂對(duì)乳脂合成影響實(shí)驗(yàn)，鑒定SREBP1在乳脂合成中的功能。實(shí)驗(yàn)通過添加硬脂酸和血清檢測(cè)對(duì)SR

3、EBP1表達(dá)影響及對(duì)乳脂合成影響，確定硬脂酸和血清是否通過調(diào)節(jié)SREBP1從而調(diào)節(jié)乳脂合成，進(jìn)一步闡明SREBP1對(duì)乳脂合成能力的影響。實(shí)驗(yàn)部分使用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qRT-PCR)檢測(cè)乳脂合成相關(guān)基因SREBP1，ACC，F(xiàn)AS，SCD，m-TOR，F(xiàn)ABP3，PPARγ mRNA的表達(dá);蛋白質(zhì)免疫印記(Western Blotting)方法檢測(cè)SREBP1，p-SREBP1，mTOR，p-mTOR蛋白表達(dá);免疫熒光法(IF)檢測(cè)S

4、REBP1，p-mTOR表達(dá)定位情況;脂滴染色檢測(cè)細(xì)胞脂滴含量;甘油三酯試劑盒檢測(cè)細(xì)胞分泌甘油三酯含量。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明(1) SREBP1過表達(dá)后，SREBP1，ACC，F(xiàn)AS，SCD，m-TOR, FABP3基因表達(dá)顯著增加(p＜0.01)，PPARγ無顯著變化(p＞0.05); SREBP1，p-SREBP1蛋白表達(dá)顯著升高(p＜0.01)，mTOR和p-mTOR蛋白表達(dá)量無顯著變化(p＜0.05); IF方法檢測(cè)SREB

5、P1表達(dá)量都顯著升高(p＜0.01)，p-mTOR表達(dá)量升高不顯著(p＜0.05);脂滴含量與甘油三酯含量顯著升高(p＜0.01)。(2) SREBP1基因沉寂后，SREBP1，ACC，F(xiàn)AS，SCD，F(xiàn)ABP3基因表達(dá)顯著下降(p＜0.01)，m-TOR, PPARγ無顯著變化(p＞0.05); SREBP1，p-SREBP1和mTOR蛋白表達(dá)量都顯著降低(p＜0.01)，p-mTOR變化不明顯(p＜0.05); IF方法檢測(cè)SREB

6、P1和p-mTOR表達(dá)量都顯著降低(p＜0.01);脂滴含量與甘油三酯含量顯著降低(p＜0.01)。(3)添加硬脂酸和血清后，SREBP1，ACC，F(xiàn)AS，SCD，m-TOR，F(xiàn)ABP3 mRNA表達(dá)水平顯著升高;SREBP1，p-SREBP1，mTOR, p-mTOR蛋白表達(dá)水平在D+S+B，D+B，D+S組中都升高，而在D+S+B組中升高最顯著(p＜0.01); IF方法檢測(cè)SREBP1和p-mTOR表達(dá)量在各處理組中都顯著升高(p