層粘連蛋白受體在人多發(fā)性骨髓瘤細胞中的表達及PI3-K信號通路與其表達的關系.pdf

1、背景： 人多發(fā)性骨髓瘤是一種常見的嚴重危害人類健康的造血系統(tǒng)的惡性腫瘤，以異常漿細胞的惡性增殖為特點。盡管近年來多發(fā)性骨髓瘤的基礎研究和臨床研究取得了長足的進展，但是目前為止，多發(fā)性骨髓瘤還是一種不能治愈的血液系統(tǒng)的惡性的疾病。因此有必要探索新的多發(fā)性骨髓瘤的治療策略。 67KD層粘連蛋白受體是非整合素家族的層粘連蛋白的高親和力受體，近年來的一些實驗研究發(fā)現(xiàn)，67KD層粘連蛋白受體在許多惡性腫瘤中異常表達，并且與腫瘤的浸

2、潤轉移密切相關。而且發(fā)現(xiàn)在一系列生長因子和細胞因子激發(fā)的信號傳導中，P13-K信號通路被證明參與腫瘤的浸潤與轉移。 有研究表明67KD層粘連蛋白受體在多種惡性腫瘤細胞如卵巢癌、肺癌、髓細胞白血病細胞中表達增多，但在人多發(fā)性骨髓瘤細胞中的表達未見報道。為此我們用RT-PCR、免疫熒光、流式細胞術等手段和方法探討了67KD層粘連蛋白受體在人多發(fā)性骨髓瘤細胞株及正常造血細胞中的表達，并研究了PI3-K信號通路與67KD層粘連蛋白受體表

3、達的關系。 實驗材料和方法： 1.細胞培養(yǎng)(1)人多發(fā)性骨髓瘤細胞培養(yǎng)：U266、RPMI8226、KM3細胞株。(2)正常人造血細胞培養(yǎng)：正常人外周血單個核細胞來自健康志愿者和浙江省血液中心成分輸血全血細胞分離后的殘留，正常人骨髓單個核細胞來自非腫瘤病人的股骨。 2.單個核細胞分離：Ficoll-Hypaque密度梯度離心法。 3.層粘連蛋白受體mRNA水平表達：半定量RT-PCR技術擴增67KD LR

4、完整編碼區(qū)，以β-actin為內對照。 4.層粘連蛋白受體蛋白的表達及亞細胞定位：采用間接免疫雙熒光染色法。 5.P13-K信號通路抑制劑對U266細胞株增殖抑制作用：采用MTT法。 6.P13-K信號通路抑制劑處理U266細胞株后層粘連蛋白受體mRNA的表達：采用半定量．RT-PCR技術，以β-actin為內對照。 7.P13-K信號通路抑制劑處理U266細胞株后層粘連蛋白受體蛋白的表達：采用流式細胞分

5、析技術。 結果： 從RT-PCR的結果可知，與正常造血細胞相比，67KD層粘連蛋白受體的mRNA在三株人多發(fā)性骨髓瘤細胞株中均呈過度表達狀態(tài)。 間接免疫雙熒光的結果與RT-PCR的結果基本一致，67KD層粘連蛋白受體的蛋白在人多發(fā)性骨髓瘤細胞株中均呈高表達狀態(tài)，并且主要分布于細胞的胞漿中。 應用P13-K信號通路抑制劑LY-294002作用U266細胞株48h后，67KD層粘連蛋白受體mRNA的表達出現(xiàn)明

6、顯抑制。流式細胞分析術的結果也顯示LY-294002作用U266細胞株48h后，67KD層粘連蛋白受體蛋白的表達也降低。 結論： 1.層粘連蛋白受體在人多發(fā)性骨髓瘤細胞中在核酸轉錄水平，蛋白水平呈高表達。 2.P13-K信號通路抑制劑LY-294002能夠明顯抑制人多發(fā)性骨髓瘤細胞中層粘連蛋白受體的表達，提示層粘連蛋白受體與PI3-K信號通路存在相互關系。 3.P13-K信號通路抑制劑LY-294002能