瘦素在Vogt-小柳原田綜合征發(fā)病中作用及機(jī)制的研究.pdf

1、本課題的研究主要分為以下三部分： 第一部分 瘦素在Vogt-小柳原田綜合征血清中表達(dá)的測(cè)定 目的:檢測(cè)VKH綜合征活動(dòng)期、靜止期患者及正常人血清中瘦素的表達(dá)，初步確定瘦素是否在VKt{綜合征中可能的作用。 方法: (1)抽取VKH綜合征患者和正常人外周靜脈血2ml，靜置至凝固，常溫分離血清，，-70℃儲(chǔ)存?zhèn)溆茫?(2)采用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)檢測(cè)血清中瘦素的水平； (3)分別測(cè)量

2、VKH綜合征患者及正常人的身高體重，在消除體重指數(shù)后再分析比較VKH患者與正常對(duì)照間的瘦素水平。 結(jié)論:瘦素在VKH活動(dòng)期患者血清中的表達(dá)顯著高于VKH靜止期和正常人，這就提示其可能在VKH綜合征的發(fā)病中發(fā)揮一定的作用，為我們下一步的研究奠定基礎(chǔ)。 第二部分 瘦素對(duì)VKH患者外周血中單個(gè)核細(xì)胞增殖的作用 目的:體外實(shí)驗(yàn)檢測(cè)瘦素對(duì)VKH綜合征患者及正常對(duì)照外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)增殖的作用。 方法:

3、 (1)采用密度梯度離心法分離VKI-I綜合征患者及正常對(duì)照的PBMC； (2)不加入或加入不同濃度的重組人瘦素下對(duì)VKH綜合征患者及正常對(duì)照的PBMC培養(yǎng)5天，用3H—TdR摻入法檢測(cè)在瘦素刺激下人PBMC的增殖率。 結(jié)論:瘦素可誘導(dǎo)VKH活動(dòng)期患者PBMC顯著增殖，且呈劑量依賴性，適當(dāng)劑量的瘦素誘導(dǎo)活動(dòng)期患者PBMC的增殖顯著高于VKH靜止期和正常人，這提示瘦素在VKH綜合征發(fā)病中可能通過促淋巴細(xì)胞異常增殖的方式

4、發(fā)揮作用。 第三部分 瘦素對(duì)VKH患者PBMC細(xì)胞因子分泌的作用 目的:體外實(shí)驗(yàn)檢測(cè)瘦素對(duì)VKH綜合征活動(dòng)期及靜止期患者PBMC細(xì)胞因子分泌的作用。 方法: (1)密度梯度離心法分離VKH綜合征患者的PBMC，與等量的絲裂霉素處理后的正常人PBMC混合培養(yǎng)，行混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)(MLR)，不加入或加入瘦素刺激下培養(yǎng)3天； (2)采用ELISA方法檢測(cè)上清中IL-17和IFN-γ的水平； 結(jié)論

5、:瘦素可誘導(dǎo)VKH活動(dòng)期患者PBMC促炎癥因子IFN-γ和IL-17的表達(dá)增高，而在靜止期VKH患者中這種促進(jìn)作用并不明顯，這提示瘦素在VKH綜合征發(fā)病中也可通過促淋巴細(xì)胞分泌炎癥細(xì)胞因子的方式發(fā)揮作用。 小結(jié): 本文以VKH活動(dòng)期、靜止期病人和正常對(duì)照為研究對(duì)象，用ELISA方法檢測(cè)血清中瘦素水平；分離外周血單個(gè)核細(xì)胞，在重組人瘦素刺激下培養(yǎng)，用3H-TdR摻入法檢測(cè)在瘦素刺激下人PBMC的增殖率，并檢測(cè)培養(yǎng)上清中炎癥