IL-22在Behcet病及Vogt-小柳原田綜合征中的表達(dá)及其影響因素的研究.pdf

1、第一部分IL-22在Behcet病中的表達(dá)及其意義
　　 1.目的：
　　 檢測IL-22在Behcet病患者外周血及皮損中的表達(dá)情況，分析其與疾病活動及臨床癥狀的相關(guān)性。
　　 2.方法:
　　 2.1密度梯度法分離患者及正常人外周單個核細(xì)胞(PBMCs)，磁珠分選CD4+T細(xì)胞，加入抗CD3和CD28抗體刺激行細(xì)胞培養(yǎng)。
　　 2.2采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測患者及健康對照者血清、P

2、BMCs及CD4+T細(xì)胞培養(yǎng)上清中IL-22的含量。
　　 2.3流式細(xì)胞儀檢測外周血中IL-22+CD4+T細(xì)胞、IL-22+CD8+T細(xì)胞的比例，及IL-22、IL-17共表達(dá)的情況。
　　 2.4 Real-time PCR法檢測結(jié)節(jié)性紅斑中IL-22mRNA的表達(dá)。
　　 2.5依據(jù)PBMC培養(yǎng)上清中IL-22的含量將患者分為“IL-22正常組”與“IL-22高表達(dá)組”，分別與臨床特點，血清標(biāo)志物進(jìn)行統(tǒng)計

3、學(xué)分析。
　　 3.結(jié)果：
　　 3.1 IL-22在活動期BD患者，靜止期BD患者，急性特發(fā)性前葡萄膜炎患者及正常人的血清水平?jīng)]有顯著性差異。
　　 3.2在活動期Behcet病患者中， PBMCs細(xì)胞培養(yǎng)上清中的IL-22含量顯著高于靜止期Behcet患者，急性特發(fā)性前葡萄膜炎患者及正常人。同樣，在活動期Behcet病患者中，CD4+T細(xì)胞培養(yǎng)上清中的IL-22含量顯著高于靜止期Behcet患者及正常人。

4、r>　　 3.3在活動期Behcet病患者中，IL-22+CD4+T細(xì)胞的比例顯著高于靜止期Behcet患者及正常人。同時，IL-22，IL-17雙陽性的CD4+T細(xì)胞的比例在活動期BD患者也顯著升高。BD患者及正常人均只有小部分IL-22+CD4+T細(xì)胞(21％-27％)共表達(dá)IL-17，而大部分的IL-22+CD+T細(xì)胞是IL-17陰性的。
　　 3.4結(jié)節(jié)性紅斑中IL-22的mRNA表達(dá)顯著高于正常皮膚。
　　

5、3.5 BD患者PBMCs培養(yǎng)上清中升高的IL-22與前房細(xì)胞，視網(wǎng)膜血管炎及結(jié)節(jié)性紅斑正相關(guān)。
　　 4.結(jié)論：
　　 實驗結(jié)果顯示IL-22的表達(dá)與Behcet病的活動性及小血管炎相關(guān)，提示其可能參與了Behcet病的發(fā)病。
　　 第二部分Behcet病中IL-23，地塞米松及環(huán)孢素A對IL-22表達(dá)的影響
　　 1.目的：
　　 研究BD患者中，IL-23是否可誘導(dǎo)IL-22分泌，地塞米松及

6、環(huán)孢素A是否可抑制IL-22的分泌。
　　 2.方法：
　　 2.1分離BD患者及在正常人PBMCs，磁珠分選CD4+T細(xì)胞，進(jìn)行不同條件下細(xì)胞培養(yǎng)。
　　 2.2 CD4+T細(xì)胞分4組。1組為基礎(chǔ)培養(yǎng)組，2組加入抗CD3和CD28抗體，3組加抗CD3和CD28抗體及rhIL-23，4組為只加入rhIL-23組。
　　 2.3 PBMCs細(xì)胞分6組。1組為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，2組每孔加入抗CD3和CD28抗體刺激

7、，3組在B組基礎(chǔ)上加入不同濃度的地塞米松，4組在B組基礎(chǔ)上加入不同濃度的環(huán)孢素A。5組在C組基礎(chǔ)上加入rhIL-23。6組在D組基礎(chǔ)上加入rhIL-23。
　　 3.結(jié)果：
　　 3.1 IL-23可以誘導(dǎo)BD患者和正常人活化的CD4+T細(xì)胞分泌IL-22顯著增加。并且在活動期的BD患者中，rIL-23誘導(dǎo)CD4+T細(xì)胞產(chǎn)生的IL-22顯著高于靜止期BD患者和正常人。
　　 3.2地塞米松和環(huán)孢素A在體外均可抑制

8、患者及正常人PBMCs分泌IL-22，并且在一定濃度范圍內(nèi)，這種抑制作用呈劑量依賴性。100ng/ml地塞米松可抑制70％IL-22的產(chǎn)生，10ng/ml環(huán)孢素A可抑制80％IL-22的產(chǎn)生。
　　 3.3 PBMCs加入地塞米松或環(huán)孢素A培養(yǎng)后，活動期BD患者和正常人rIL-23誘導(dǎo)PBMCs分泌IL-22的能力均明顯受到抑制。
　　 4.結(jié)論：
　　 活動期BD患者中，IL-22的表達(dá)增加可能由于其上游的IL

9、-23誘導(dǎo)分泌所致，提示BD中IL-23/IL-22通路的存在。地塞米松及環(huán)孢素A可抑制IL-22的產(chǎn)生。
　　 第三部分IL-22在Vogt-小柳原田綜合征中的表達(dá)及其意義
　　 1.目的：
　　 檢測IL-22在VKH患者外周血中的表達(dá)情況，分析其與疾病活動的相關(guān)性。
　　 2.方法：
　　 2.1采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測患者及健康對照者血清、PBMCs及CD4+T細(xì)胞的培養(yǎng)上清中

10、IL-22的含量
　　 2.2流式細(xì)胞儀檢測VKH患者及正常人外周血中IL-22+CD4+/CD8+T細(xì)胞，IL-22+IL-17+CD4+T的比例。
　　 2.3依據(jù)VKH患者PBMC培養(yǎng)上清中IL-22的含量將患者分為“IL-22正常組”與“IL-22高表達(dá)組”，分別與臨床特點，血清標(biāo)志物進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。
　　 3.結(jié)果：
　　 3.1 IL-22在活動期VKH患者，靜止期VKH患者及正常人的血清水平

11、沒有顯著性差異。
　　 3.2在PBMCs及CD4+T細(xì)胞培養(yǎng)上清中的IL-22含量，活動期VKH病患者中顯著高于靜止期VHK患者及正常人。
　　 3.3 IL-22+CD4+T細(xì)胞的比例，活動期VKH病患者顯著高于靜止期VKH患者及正常人。IL-22+CD8+T細(xì)胞的比例在三者之間沒有顯著性差異。在VKH患者及正常人中，CD4+T細(xì)胞均是分泌IL-22的主要細(xì)胞。IL-22,IL-17雙陽性的CD4+T細(xì)胞的比例在活動

12、期VKH患者中也顯著升高。
　　 3.4 VKH患者PBMCs培養(yǎng)上清中升高的IL-22與羊脂狀KP，前房細(xì)胞成正相關(guān)。
　　 4.結(jié)論：
　　 實驗結(jié)果顯示IL-22的表達(dá)與VKH綜合征的活動性正相關(guān)，提示其可能參與了VKH綜合征的發(fā)病。
　　 第四部分VKH綜合征中IL-23，地塞米松及環(huán)孢素A對IL-22表達(dá)的影響
　　 1.目的：
　　 研究VKH患者中，IL-23是否可誘導(dǎo)IL-

13、22分泌，地塞米松及環(huán)孢素A是否可抑制IL-22的分泌。
　　 2.方法：
　　 2.1分離VKH患者及在正常人PBMCs，磁珠分選CD4+T細(xì)胞，進(jìn)行不同條件下細(xì)胞培養(yǎng)。
　　 2.2 CD4+T細(xì)胞分4組。1組為基礎(chǔ)培養(yǎng)組，2組加入抗CD3和CD28抗體，3組加抗CD3和CD28抗體及rhIL-23，4組只加rhIL-23。
　　 2.3 PBMCs細(xì)胞分5組。1組為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，2組每孔加入抗CD3和

14、CD28抗體刺激，3組在B組基礎(chǔ)上加入不同濃度的地塞米松，4組在B組基礎(chǔ)上加入不同濃度的環(huán)孢素A。5組在B組基礎(chǔ)上加入10ng/ml環(huán)孢素A及100ng/ml地塞米松。
　　 3.結(jié)果：
　　 3.1 IL-23可以誘導(dǎo)VKH患者和正常人抗CD3抗體和抗CD28抗體刺激的CD4+T細(xì)胞分泌IL-22顯著增加。在活動期的VKH患者中，rIL-23誘導(dǎo)CD4+T細(xì)胞產(chǎn)生的IL-22顯著高于靜止期患者和正常人。