ABCC4基因在NK-T細(xì)胞淋巴瘤中的表達(dá)和意義.pdf

1、背景:
　　NK/T細(xì)胞淋巴瘤(NKTCL)是惡性淋巴瘤的一種亞型，高發(fā)于亞洲和南美洲人群。在發(fā)病機(jī)制、診斷分型及臨床治療上都比較復(fù)雜。早期腫瘤比較局限，但可以很快發(fā)展至全身。具有侵襲性高，病程進(jìn)展快，生存期短，對(duì)含蒽環(huán)類化療方案耐藥和預(yù)后差等特點(diǎn)。因此，尋找其發(fā)病原因及耐藥機(jī)制十分必要。
　　目的:
　　1.檢測(cè)ABCC4基因在NK/T細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞株和組織中的表達(dá)情況。
　　2.探討ABCC4基因表達(dá)情況和臨

2、床療效的關(guān)系。
　　3.構(gòu)建ABCC4基因高表達(dá)和干擾表達(dá)慢病毒載體，進(jìn)一步檢測(cè)其表達(dá)量對(duì)NK/T細(xì)胞淋巴瘤的影響。
　　方法:
　　1.利用數(shù)字基因表達(dá)譜（digitalgeneexpression，DGE）技術(shù)和耐藥相關(guān)基因PCR基因芯片技術(shù)初步檢測(cè)出ABCC4基因在NK/T細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞株中的表達(dá)情況。
　　2.應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(Realtime-PCR)技術(shù)檢測(cè)NK/T細(xì)胞淋巴瘤SNK-6、YTS細(xì)

3、胞株與正常NK細(xì)胞ABCC4基因的表達(dá)情況。
　　3.免疫組織化學(xué)法(IHC)檢測(cè)110例組織標(biāo)本其中NK/T細(xì)胞淋巴瘤(60例)組織及鼻炎和鼻息肉組織（50例）中ABCC4基因蛋白表達(dá)水平。
　　4.根據(jù)ABCC4基因mRNA序列，設(shè)計(jì)二個(gè)靶向ABCC4基因的靶點(diǎn)，設(shè)計(jì)shRNA序列。設(shè)計(jì)引物，PCR擴(kuò)增ABCC4基因cDNA序列，測(cè)序鑒定，構(gòu)建慢病毒載體pCDH-ABCC4和pLL3.7-ABCC4-siR。制備出重組慢

4、病毒Lenti-ABCC4和Lenti-ABCC4-siR。
　　5.通過(guò)Realtime-PCR和Westernblot技術(shù)評(píng)價(jià)感染慢病毒后的NK/T細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞株ABCC4基因表達(dá)情況，同時(shí)篩選出沉默效率最高的shRNA。
　　6.CCK-8實(shí)驗(yàn)和流式細(xì)胞術(shù)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)不同藥物作用于正常表達(dá)及高表達(dá)和低表達(dá)ABCC4基因NK/T細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞株的敏感性。
　　結(jié)果:
　　1.實(shí)時(shí)熒光定量PCR(Realtime

5、-PCR)技術(shù)和免疫組織化學(xué)法結(jié)果顯示，與正常NK細(xì)胞相比較，ABCC4基因在NK/T細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞株和組織上高表達(dá)，其表達(dá)量的高低和臨床療效呈負(fù)相關(guān)。
　　2.成功構(gòu)建了慢病毒表達(dá)載體pCDH-ABCC4、pLL3.7-ABCC4-siR，并制備出重組慢病毒Lenti-ABCC4和Lenti-ABCC4-siR，篩選出有效的干擾重組病毒，感染NK/T細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞株后能有效提高和降低ABCC4基因的表達(dá)。
　　3.降低AB