不同抗原在小鼠脾臟和胸腺內(nèi)誘導(dǎo)的免疫效應(yīng).pdf

1、研究背景及目的:
　　胸腺是哺乳動(dòng)物的中樞免疫器官，骨髓來(lái)源的前T淋巴細(xì)胞在此發(fā)育、分化和成熟，然后遷移到外周免疫器官參與免疫應(yīng)答，胸腺為T(mén)淋巴細(xì)胞的發(fā)育過(guò)程提供了必要的微環(huán)境，經(jīng)典的免疫學(xué)理論認(rèn)為，T細(xì)胞在發(fā)育的過(guò)程中會(huì)與表達(dá)自身MHC分子的細(xì)胞相互作用，經(jīng)歷陽(yáng)性選擇和陰性選擇篩選出對(duì)外界抗原免疫應(yīng)答而對(duì)自身抗原免疫耐受的成熟T淋巴細(xì)胞。同時(shí)根據(jù)中樞耐受的誘導(dǎo)理論，T淋巴細(xì)胞在發(fā)育成熟的過(guò)程中，一旦接觸到同種異基因抗原就會(huì)誘導(dǎo)出

2、對(duì)該抗原免疫耐受。由于血胸屏障的存在，血液中的大分子物質(zhì)包括外界抗原不能夠進(jìn)入胸腺，所以早前對(duì)于胸腺內(nèi)的免疫及其相關(guān)機(jī)制研究未能受到關(guān)注。
　　脾臟是哺乳動(dòng)物的外周免疫器官，當(dāng)外界抗原侵入機(jī)體，在脾臟會(huì)引發(fā)特異性的細(xì)胞免疫和體液免疫。脾臟內(nèi)也存在血-脾屏障，血-脾屏障有很強(qiáng)的選擇透過(guò)性，這種選擇性針對(duì)的是抗原的性質(zhì)而非完全是抗原的大小，但抗原在脾臟內(nèi)發(fā)生免疫應(yīng)答時(shí)是否對(duì)胸腺的微環(huán)境有影響？目前卻鮮有報(bào)道。
　　為探索不同抗原

3、在小鼠脾臟和胸腺內(nèi)誘導(dǎo)的免疫效應(yīng)，我們首先采用AFP（人甲胎蛋白）作為外源性抗原分子，對(duì)C57BL/6小鼠進(jìn)行免疫，研究胸腺和脾臟對(duì)外界抗原的免疫狀態(tài)有何不同，并采用人肝癌細(xì)胞HepG2作為異種抗原細(xì)胞在C57BL/6小鼠胸腺內(nèi)注射的方法，研究了異種抗原細(xì)胞在胸腺中的命運(yùn)及其可能誘導(dǎo)的免疫效應(yīng)。
　　研究方法:
　　1.外源性抗原分子（人AFP）經(jīng)外周免疫后對(duì)小鼠脾臟和胸腺的影響
　　1) C57BL/6小鼠的外周AF

4、P免疫
　　2) C57BL/6小鼠脾臟和胸腺稱(chēng)重及各自總淋巴細(xì)胞的計(jì)數(shù)
　　3) C57BL/6小鼠脾臟石蠟切片的制作及HE染色
　　2.外源性抗原細(xì)胞（人HepG2）在小鼠胸腺內(nèi)誘導(dǎo)的免疫應(yīng)答
　　1) C57BL/6小鼠胸腺發(fā)育情況的分析
　　2) HepG2細(xì)胞培養(yǎng)與熒光材料DiI標(biāo)記
　　3) HepG2細(xì)胞的C57BL/6小鼠胸腺內(nèi)注射及注射結(jié)果的解剖學(xué)觀察
　　4)不同時(shí)間檢點(diǎn)的胸

5、腺石蠟切片的制作與HE染色觀察
　　5)不同時(shí)間檢點(diǎn)的石蠟切片與熒光顯微鏡觀察
　　研究結(jié)果:
　　第一部分
　　1.一次免疫組小鼠的脾臟重量和總淋巴細(xì)胞數(shù)比對(duì)照組小鼠的脾重和總淋巴細(xì)胞數(shù)略微提高，胸腺重量和總淋巴細(xì)胞數(shù)較對(duì)照組都略微降低，但總體變化不明顯。再次免疫組的脾臟重量與總淋巴細(xì)胞數(shù)與對(duì)照組和一次免疫組有明顯的差別，其重量是對(duì)照組的2.6倍以上，總淋巴細(xì)胞數(shù)目是對(duì)照組的10倍以上，再次免疫組的胸腺重量與一

6、次免疫組和對(duì)照組無(wú)明顯差異。
　　2.一次免疫組小鼠的脾臟白髓與紅髓比例與對(duì)照組相似，而再次免疫小鼠的脾臟白髓比例明顯增加。
　　第二部分
　　1.C57BL/6小鼠胸腺?gòu)某錾角啻喊l(fā)育期一直在快速的增長(zhǎng)，其體積和重量都有明顯增加，在6周左右時(shí)到頂峰，之后胸腺開(kāi)始萎縮，體積變小，重量下降。
　　2.HepG2細(xì)胞被全部標(biāo)記，在綠色熒光的激發(fā)下細(xì)胞發(fā)出強(qiáng)烈的紅色熒光。
　　3.不同時(shí)間檢點(diǎn)的胸腺都顯現(xiàn)出被標(biāo)記

7、的腫瘤細(xì)胞或組織，表明肝癌細(xì)胞在胸腺內(nèi)注射成功。
　　4.小鼠胸腺對(duì)異種抗原細(xì)胞產(chǎn)生免疫排斥，3-14天胸腺上皮細(xì)胞對(duì)腫瘤組織進(jìn)行完全包繞，逐步出現(xiàn)淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，巨噬細(xì)胞聚集，最終導(dǎo)致腫瘤組織壞死。
　　5.在腫瘤組織形成初期，周?chē)奂写罅康牧馨图?xì)胞，5天左右出現(xiàn)淋巴細(xì)胞在腫瘤組織內(nèi)的浸潤(rùn)，7天左右腫瘤細(xì)胞出現(xiàn)大量死亡，在腫瘤塊中心的淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)區(qū)可觀察到有空洞狀斑塊的出現(xiàn)。
　　結(jié)論:
　　1.AFP抗原免疫