轉(zhuǎn)牛MyoG和Myf6基因F1代小鼠脾臟免疫功能的比較.pdf

1、轉(zhuǎn)基因技術(shù)是上世紀(jì)80年代發(fā)展起來(lái)的一項(xiàng)生物技術(shù)，在此基礎(chǔ)上，人們開(kāi)始制備帶有優(yōu)良性狀的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物，將轉(zhuǎn)基因動(dòng)物應(yīng)用到畜牧業(yè)、醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)、生命科學(xué)、食品科學(xué)等領(lǐng)域中去，使轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的研究蓬勃發(fā)展，展現(xiàn)出良好的應(yīng)用前景，受到人們的廣泛關(guān)注。
　　近二十年來(lái)，轉(zhuǎn)基因動(dòng)物研究發(fā)展迅速，獲得了多種轉(zhuǎn)基因動(dòng)物，但在畜牧生產(chǎn)中，轉(zhuǎn)基因家畜要達(dá)到商業(yè)化育種還有很多問(wèn)題亟待解決，例如，轉(zhuǎn)基因動(dòng)物抗病力低、死亡率高、生產(chǎn)性能低下等，這不僅嚴(yán)重影響了轉(zhuǎn)

2、基因動(dòng)物的健康，對(duì)人類健康、社會(huì)穩(wěn)定和環(huán)境安全也存在著潛在的威脅。
　　為了研究外源基因?qū)雽?duì)宿主免疫功能的影響，我們選擇F1代轉(zhuǎn)MyoG和Myf6基因小鼠為研究對(duì)象，通過(guò)RT-PCR、MTT和ANAE等方法，研究外源基因整合對(duì)宿主脾臟的細(xì)胞免疫和體液免疫及相關(guān)細(xì)胞因子mRNA表達(dá)水平的影響，進(jìn)一步推動(dòng)了轉(zhuǎn)基因技術(shù)在遺傳育種上的應(yīng)用。本文研究主要內(nèi)容如下:
　　1)提取了F1代轉(zhuǎn)基因小鼠的基因組，采用普通PCR方法對(duì)小鼠DN

3、A進(jìn)行鑒定，篩選具有外源基因的小鼠作為后續(xù)研究對(duì)象。結(jié)果顯示，共獲得6只轉(zhuǎn)牛MyoG基因小鼠和7只轉(zhuǎn)牛Myf6基因小鼠。
　　2)采用絕對(duì)熒光定量PCR法檢測(cè)了F1代小鼠的拷貝數(shù)。結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)MyoG基因小鼠大多為6-7個(gè)拷貝，轉(zhuǎn)牛Myf6基因小鼠則是1-2個(gè)拷貝。
　　3)檢測(cè)了轉(zhuǎn)基因小鼠的脾臟指數(shù)、淋巴細(xì)胞增殖能力、T淋巴數(shù)量與淋巴細(xì)胞凋亡率。結(jié)果顯示:轉(zhuǎn)基因小鼠在脾臟指數(shù)、淋巴細(xì)胞增殖能力均顯著下降;T淋巴細(xì)胞數(shù)量在轉(zhuǎn)

4、牛Myf6基因小鼠中均極顯著降低(P＜0.01)，在轉(zhuǎn)牛MyoG基因中小鼠中也下降了，但個(gè)別差異不顯著;淋巴細(xì)胞凋亡凋亡率極顯著升高(P＜0.01)，表明轉(zhuǎn)基因小鼠的免疫功能受抑制。
　　4)通過(guò)熒光定量PCR檢測(cè)轉(zhuǎn)基因小鼠的脾臟IL-2、IFN-γ、 IL-4、IL-6及TNF-a mRNA表達(dá)情況。結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)牛MyoG和轉(zhuǎn)牛Myf6基因小鼠脾臟中IL-2和IFN-γ mRNA的表達(dá)下降，證明外源基因插入抑制了宿主脾臟的細(xì)胞免

5、疫功能;轉(zhuǎn)Myf6小鼠IL-4的表達(dá)顯著降低，而轉(zhuǎn)牛MyoG基因小鼠的降低不明顯，證明外源基因的插入會(huì)抑制小鼠的體液免疫;部分轉(zhuǎn)牛MyoG和Myf6基因小鼠中IL-6和TNF-a表達(dá)上調(diào)，提示外源基因的插入使機(jī)體免疫力下降并且發(fā)生了炎癥反應(yīng)。
　　5)比較兩種轉(zhuǎn)?；蛐∈蟮耐庠椿蚩截悢?shù)與機(jī)體免疫力之間的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)牛MyoG小鼠的外源基因拷貝數(shù)明顯多于轉(zhuǎn)牛Myf6小鼠，但是轉(zhuǎn)牛MyoG小鼠的脾臟指數(shù)、T和B淋巴細(xì)胞增殖能力及T淋