大豆干旱應(yīng)激相關(guān)基因的克隆及分析.pdf

1、本研究利用RT-PCR和3'race技術(shù)從大豆中克隆了一條干旱脅迫應(yīng)激相關(guān)序列，并對(duì)其進(jìn)行了生物信息學(xué)分析，選取了7份不同大豆材料，苗期用20％PEG6000進(jìn)行模擬干旱脅迫處理，利用半定量RT-PCR方法測(cè)定處理后1～6 d該干旱應(yīng)激相關(guān)基因的表達(dá)量變化，并測(cè)定干旱脅迫后1～6 d的超氧化物歧化酶(SOD)、過(guò)氧化物酶(POD)活性和游離脯氨酸(Pro)、可溶性糖(WSS)、葉綠素和丙二醛(MDA)含量等6個(gè)生理生化指標(biāo)的變化情況，以

2、期研究不同大豆類(lèi)型中該基因表達(dá)量、相關(guān)生理生化指標(biāo)隨干旱脅迫時(shí)間的變化趨勢(shì)，探討抗旱機(jī)制，為野生大豆抗旱種質(zhì)資源利用、大豆抗旱育種提供理論依據(jù)。本研究得出以下結(jié)論:
　　1.獲得了大小為3375 bp的大豆干旱應(yīng)激相關(guān)基因序列，并在GenBank上注冊(cè)，登錄號(hào)為KJ017967。利用生物信息學(xué)方法對(duì)所克隆得到的基因序列及其編碼蛋白進(jìn)行分析，得出該基因序列為T(mén)y3-gypsy型反轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)座子的pol蛋白編碼基因序列，其包含三個(gè)開(kāi)放閱讀

3、框，長(zhǎng)度為597 bp、543 bp和951 bp，分別編碼198、180和316個(gè)氨基酸，編碼的3個(gè)蛋白依次為反轉(zhuǎn)錄酶、RNaseH和整合酶，將3個(gè)基因分別命名為GmRT、GmRNaseH和GmINT。
　　2.建立了該干旱應(yīng)激相關(guān)基因的半定量RT-PCR體系，該基因在干旱脅迫下表達(dá)量增加，干旱脅迫1～6 d中表達(dá)量呈先升后降再升高最后降低的變化趨勢(shì)，表明干旱脅迫誘導(dǎo)了該轉(zhuǎn)座子基因的表達(dá)。
　　3.在干旱脅迫下，不同材料大