S100A12在新生大鼠膿毒血癥中的表達(dá)及意義.pdf

1、目的：S100A12是小分子鈣結(jié)合蛋白,被認(rèn)為在感染性疾病中發(fā)揮重要的生物學(xué)作用。本課題擬通過(guò)建立新生大鼠膿毒血癥模型,觀察血清中S100A12蛋白在膿毒血癥中的動(dòng)態(tài)變化水平,分析肝臟組織中 S100A12與促炎因子晚期糖基化終末產(chǎn)物受體(Receptor for advanced glycation end-products,RAGE)、核轉(zhuǎn)錄因子-κB(Nuclear transcription factor kappa B,NF-

2、κB)、腫瘤壞死因子-α(Tumor necrosis factor-α, TNF-α)、白介素-6(Interleukin-6,IL-6)mRNA之間的關(guān)系,探討S100A12在新生大鼠膿毒血癥發(fā)病機(jī)制中的作用,從而為膿毒血癥的早期診斷提供方向。
　　方法：選用7日齡新生Sprague-Dawley(SD)大鼠,隨機(jī)分為兩組,即膿毒血癥實(shí)驗(yàn)組、對(duì)照組。采用腹腔注射脂多糖(Lipopolysaccharides,LPS)建立膿毒血

3、癥模型組,對(duì)照組經(jīng)腹腔注射相同容積的生理鹽水。兩組動(dòng)物按實(shí)驗(yàn)后2h、4h、8h、16h、24h、48h分為6個(gè)亞組,戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉后,心臟采血(約1.5ml),取血清,留取肝臟組織,-80℃保存。采用ELISA法檢測(cè)血清S100A12的蛋白水平。采用RT-PCR測(cè)定肝臟組織中S100A12、RAGE、NF-κB及TNF-α、IL-6mRNA的相對(duì)表達(dá)量。肝臟標(biāo)本HE染色,進(jìn)行病理學(xué)觀察和評(píng)分。
　　結(jié)果：⑴血清S100A1

4、2檢測(cè)結(jié)果:大鼠各時(shí)間點(diǎn)血清S100A12水平實(shí)驗(yàn)組較對(duì)照組顯著升高(P<0.05),實(shí)驗(yàn)組相鄰兩亞組間比較存在明顯差異(P<0.05)。血清S100A12于2h迅速升高,12h達(dá)到高峰,48h仍維持較高水平。⑵肝臟病理組織觀察及評(píng)分:實(shí)驗(yàn)組大鼠24h、48h可見(jiàn)肝細(xì)胞廣泛變性、壞死,中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)。肝臟病理組織評(píng)分實(shí)驗(yàn)組顯著高于對(duì)照組(P<0.05),2h(Median:1 Vs0)、4h、8h(Median:2 Vs0)、12h、4

5、8h(Median:3 Vs0)、24h(Median:4 Vs0),實(shí)驗(yàn)組病理評(píng)分2h開(kāi)始升高,24h達(dá)最高值。⑶實(shí)驗(yàn)組大鼠血清S100A12與肝臟病理學(xué)評(píng)分呈正相關(guān)(rs=0.659,P<0.01)。⑷肝臟促炎因子 mRNA檢測(cè)結(jié)果:1)與對(duì)照組相比,實(shí)驗(yàn)組大鼠肝臟組織S100A12、REGE、NF-κB p65及TNF-α、IL-6mRNA水平均呈現(xiàn)高表達(dá);2)大鼠肝臟S100A12mRNA水平實(shí)驗(yàn)組顯著高于對(duì)照組(P<0.05)

6、,實(shí)驗(yàn)組相鄰兩亞組間存在明顯差異(P<0.05)。S100A12基因于2h迅速升高,8h達(dá)到高峰,直至48h仍保持高表達(dá);3)肝臟 S100A12基因水平與血清 S100A12蛋白水平呈正相關(guān)(r=0.599,P<0.05);4)兩組大鼠肝臟RAGEmRNA水平,2h、4h無(wú)明顯差異(P>0.05),其余時(shí)間點(diǎn)存在顯著差異。實(shí)驗(yàn)組8h Vs4h,12h Vs8h,24h Vs12h,48h Vs24h亞組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05

7、)。RAGE基因水平4h內(nèi)表達(dá)不明顯,至8h緩慢升高,12h達(dá)到峰值,至48h仍高于對(duì)照組;⑸兩組大鼠肝臟NF-κB p65 mRNA水平,48h無(wú)明顯差異(P>0.05),其余時(shí)間點(diǎn)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。實(shí)驗(yàn)組相鄰兩亞組間存在明顯差異(P<0.05)。NF-κB基因于2h開(kāi)始升高,4h明顯升高,至8h達(dá)最高峰,48h基本降至正常;⑹大鼠肝臟TNF-α mRNA水平實(shí)驗(yàn)組顯著高于對(duì)照組(P<0.05)。實(shí)驗(yàn)組相鄰兩亞組間比較

8、,存在明顯差異(P<0.05)。TNF-a基因于2h迅速升高,8h達(dá)到高峰,48h仍稍高于對(duì)照組;⑺兩組大鼠肝臟IL-6 mRNA水平,2h無(wú)明顯差異(P>0.05),其余時(shí)間點(diǎn)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。實(shí)驗(yàn)組相鄰兩亞組間存在明顯差異(P<0.05)。IL-6基因于4h開(kāi)始升高,至24h出現(xiàn)高峰,48h表達(dá)仍高于對(duì)照組;⑻肝組織S100A12mRNA與促炎因子mRNA之間呈正相關(guān):S100A12/RAGE(rs=0.511, P

9、<0.01)、S100A12/NF-κB(rs=0.468, P<0.01)、S100A12/TNF-α(rs=0.881, P<0.01)、S100A12/IL-6(rs=0.521, P<0.01)。
　　結(jié)論：①LPS誘導(dǎo)的新生大鼠膿毒血癥過(guò)程中,隨著病情進(jìn)展,肝臟組織病理?yè)p傷逐漸加重,引起S100A12、RAGE、NF-κB、TNF-α及IL-6促炎因子基因表達(dá)的增加,表明促炎因子的過(guò)度表達(dá)是造成膿毒血癥的重要原因。②實(shí)驗(yàn)