色素親和反膠團輔助溶菌酶復性的研究.pdf

1、反膠團復性法是目前國內(nèi)外最為新穎的蛋白質(zhì)復性方法之一,可見報道有限,其中除一篇使用的是非離子型反膠團外,其余幾篇使用的都是離子型反膠團,且均未修飾親和配基.本文利用新型的反膠團一色素親和反膠團輔助溶菌酶復性,色素親和反膠團是一種修飾了親和配基的非離子型反膠團,是由親和配基一活性色素辛巴藍(CB)、非離子型表面活性劑一失水山梨醇三油酸酯(Span 85)、有機溶劑正己烷(n-hexane)等在一定條件下反應得到的. 本文系統(tǒng)研究了

2、CB/Span 85/n-hexane系統(tǒng)輔助溶菌酶復性的實驗方法以及操作參數(shù)的影響,包括Span 85、CB、脲、氧化型谷胱甘肽(GSSG)、還原型谷胱甘肽(GSH)、溶菌酶的濃度,pH值,反膠團含水率(Wo),反應時間等.成功實現(xiàn)了較高濃度(3～3.5 mg/mL)溶菌酶的完全復性,體現(xiàn)出反膠團法較直接稀釋法的巨大優(yōu)勢,以及非離子型親和反膠團較單純非離子型反膠團在復性效果方面的較大優(yōu)勢；同時保證95﹪以上的溶菌酶能夠被0.5 mol

3、/LMgCl<,2>溶液反萃回收,且圓二色光譜分析證明了最終所得溶菌酶二級結構的正確性,體現(xiàn)出非離子型親和反膠團較離子型反膠團在蛋白質(zhì)回收方面的較大優(yōu)勢.在此基礎上,嘗試改進反膠團性能,如添加助溶劑、助表面活性劑等以期進一步提高復性濃度,取得了一定的效果. 在成功實現(xiàn)CB/Span 85/n-hexane系統(tǒng)輔助溶菌酶復性基礎上,本文進一步將色素親和反膠團與人工伴侶,即陽離子型表面活性劑十六烷基三甲基溴化銨(CTAB)與β-環(huán)糊