新型親和反膠團(tuán)系統(tǒng)及其蛋白質(zhì)萃取特性研究.pdf

1、反膠團(tuán)萃取技術(shù)在蛋白質(zhì)等生物活性物質(zhì)的分離領(lǐng)域中被廣泛研究.但是傳統(tǒng)的離子型反膠團(tuán)在萃取過程中往往對(duì)蛋白質(zhì)選擇性低以及使蛋白質(zhì)失活,因此本文研制出新型親和非離子反膠團(tuán)系統(tǒng),并對(duì)此反膠團(tuán)系統(tǒng)在蛋白質(zhì)分離純化過程中的萃取特性進(jìn)行了系統(tǒng)的分析研究.通過兩液相合成的方法將非離子型表面活性劑(Span 85)分子結(jié)合親和型色素染料辛巴藍(lán)(CB)分子,并以正己烷為溶劑制備出CB-Span 85親和型反膠團(tuán)系統(tǒng).利用水分測(cè)定儀和激光光散射儀對(duì)親和反膠

2、團(tuán)的性質(zhì)進(jìn)行研究.結(jié)果表明,由于親和配基CB的引入,CB-Span 85反膠團(tuán)的含水率(W<,o>),流體力學(xué)半徑(R<,h>),以及膠團(tuán)聚集數(shù)(N<,ag>均比Span 85反膠團(tuán)提高.親和反膠團(tuán)對(duì)蛋白質(zhì)的萃取率也隨CB濃度的增加而顯著增加,說明親和相互作用在萃取過程中起主導(dǎo)作用. 被萃取的蛋白質(zhì)通過1mol/L NaCl溶液進(jìn)行反萃,回收得到的蛋白質(zhì)顯示出與天然態(tài)蛋白質(zhì)完全相同的活性和二級(jí)結(jié)構(gòu),證明該親和反膠團(tuán)系統(tǒng)良好的生

3、物相容性.助劑對(duì)反膠團(tuán)萃取蛋白質(zhì)的過程具有顯著的影響,因此本文考察了正己醇作為助劑對(duì)CB-Span 85親和反膠團(tuán)性質(zhì)及蛋白質(zhì)萃取的影響.結(jié)果表明3 vol.﹪正己醇可增加反膠團(tuán)的W<,o>、R<,h>和N<,ag>,從而使反膠團(tuán)對(duì)蛋白質(zhì)的萃取率提高16﹪,并且揭示出正己醇分子幾乎參與親和反膠團(tuán)系統(tǒng)中每一個(gè)反膠團(tuán)的形成,使反膠團(tuán)界面層的曲率和硬度降低,界面層的流動(dòng)性增加. 對(duì)親和反膠團(tuán)系統(tǒng)中蛋白質(zhì)分配平衡和萃取動(dòng)力學(xué)進(jìn)行了研究

4、.結(jié)果表明蛋白質(zhì)的分配平衡等溫線可用Langmuir方程進(jìn)行擬合,并且親和配基CB和助劑正己醇濃度的增加可顯著增加親和反膠團(tuán)系統(tǒng)的萃取容量.萃取動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果反映了液膜傳質(zhì)阻力、空間位阻相互作用、親和相互作用和界面?zhèn)髻|(zhì)阻力這幾種因素協(xié)同影響CB-Span 85親和反膠團(tuán)系統(tǒng)萃取蛋白質(zhì)的動(dòng)力學(xué)傳質(zhì)過程.最后將CB-Span 85親和反膠團(tuán)系統(tǒng)應(yīng)用于實(shí)際蛋白體系的萃取分離.通過一次萃取可以使粗雞卵清白蛋白中溶菌酶的純化因子達(dá)到23.并且在反