溫敏性凝膠與海藻糖輔助變性溶菌酶復(fù)性的研究.pdf

1、本文研究了聚N-異丙基丙烯酰胺凝膠(PNIPAAm)和海藻糖促進(jìn)變性-還原溶菌酶的復(fù)性作用。首先研究了凝膠制備的最佳條件和凝膠的物理性質(zhì)，在確定最適用的凝膠后，考察了各種因素條件下(制膠溫度、酶濃度和逐漸升溫)凝膠對(duì)復(fù)性收率的影響；其次，對(duì)不同的復(fù)性條件下(溫度、pH值和鹽濃度)海藻糖對(duì)溶菌酶的復(fù)性作用進(jìn)行了研究。運(yùn)用相關(guān)動(dòng)力學(xué)模型，對(duì)不同濃度的海藻糖和鹽酸胍輔助溶菌酶復(fù)性的動(dòng)力學(xué)過(guò)程進(jìn)行了深入分析，探討了海藻糖促進(jìn)溶菌酶復(fù)性的機(jī)理。

2、 結(jié)果表明，以總單體濃度(T)為10％，交聯(lián)度(C)為5％，制膠溫度為22℃制備的PNIPAAm具有最佳的溶脹倍率和縮水倍率，并具有良好的溫敏性能。實(shí)驗(yàn)選用的PNIPAAm在4℃下溶脹倍率可達(dá)16倍以上，而在37℃條件下縮水48h后溶脹倍率僅為0.69倍，且具有良好的溶脹與收縮重復(fù)性。 利用PNIPAAm的溫敏吸放特性，完成對(duì)變性酶液在復(fù)性過(guò)程中的逐漸釋放、逐漸折疊，從而達(dá)到類似流加操作的復(fù)性效果，可有效提高最終復(fù)性收率。

3、 海藻糖具有促進(jìn)變性溶菌酶復(fù)性的作用；存在最佳的添加濃度使復(fù)性收率最高；其最佳操作條件為：pH8-8.5，復(fù)性溫度35-37℃。利用三級(jí)表觀動(dòng)力學(xué)方程擬合了不同濃度海藻糖和鹽酸胍輔助溶菌酶復(fù)性的動(dòng)力學(xué)過(guò)程。分析表明，添加海藻糖后可使聚集體生成速率常數(shù)KA明顯減小，但對(duì)復(fù)性速率常數(shù)KN影響不大；在一定鹽酸胍濃度下，隨海藻糖濃度的增大，KA先降低后升高，在最佳濃度時(shí)KA出現(xiàn)最小值，由于此時(shí)KN/KA出現(xiàn)最大值，因此復(fù)性收率r最大；在