雞源乳酸桿菌的分離鑒定及保存技術(shù)研究.pdf

1、為了開發(fā)研制禽用微生物添加劑，本研究從北京油雞盲腸黏膜和糞便中分離鑒定得到5株球菌和2株乳酸桿菌，通過OD<,600nm>值和pH值的測(cè)定，篩選出優(yōu)良乳酸桿菌，確定其最佳培養(yǎng)條件。并對(duì)優(yōu)良乳酸桿菌進(jìn)行了培養(yǎng)基優(yōu)化、50L發(fā)酵罐擴(kuò)大培養(yǎng)、冷凍干燥過程，最后將凍干菌粉用于肉雞生產(chǎn)中測(cè)定肉雞盲腸黏膜和糞便中乳酸菌與大腸桿菌的數(shù)量，結(jié)果表明： (1)本試驗(yàn)從北京油雞的盲腸黏膜和糞便中分離出了41株菌種，通過對(duì)菌種的菌落形態(tài)的觀察以及染色

2、油鏡觀察，共篩選出7株進(jìn)行乳酸菌屬種的生理生化鑒定，并根據(jù)進(jìn)一步的糖發(fā)酵試驗(yàn)，確定M1、M2為盲腸腸球菌，F(xiàn)5、F8、F11為糞腸球菌， M3為短乳桿菌，M8為戊糖乳桿菌。 (2)在通氣(加棉塞震蕩)培養(yǎng)和密閉(恒溫靜置)培養(yǎng)兩種培養(yǎng)條件下對(duì)乳酸桿菌M3和M8生長(zhǎng)OD<,600nm>值和pH值進(jìn)行了測(cè)定，結(jié)果顯示：M3在通氣培養(yǎng)條件下菌株OD<,600nm>值最高為1.154，pH值從5.86下降到4.16，密閉培養(yǎng)條件下OD<

3、,600nm>值最高值為1.157，pH值從5.85下降到4.14，M3在兩種培養(yǎng)條件下生長(zhǎng)趨勢(shì)相差不多；M8在通氣培養(yǎng)條件下菌株OD<,600nm>值為1.0 11，pH值從5.64下降到4.36，而在密閉培養(yǎng)條件下OD<,600nm>值可達(dá)到2.083，pH值從5.64降到3.42。因此，篩選M8為優(yōu)良乳桿菌，最佳培養(yǎng)條件為密閉培養(yǎng)。 (3)添加不同比例的菊粉替代部分葡萄糖，采用密閉培養(yǎng)條件，測(cè)定M8生長(zhǎng)OD<,600nm>

4、值和pH值，結(jié)果表明：M8均在20h進(jìn)入穩(wěn)定生長(zhǎng)期，2811左右OD<,600nm>達(dá)到最高值。其中效果最好的為3％菊粉添加量，最高OD<,600nm>達(dá)到2.937，pH從5.81降到3.37。 (4)采用50L發(fā)酵罐擴(kuò)大培養(yǎng)，在發(fā)酵到20h時(shí)，M8開始平穩(wěn)生長(zhǎng)，進(jìn)入穩(wěn)定期，在23h時(shí)達(dá)到最高值，OD<,600nm>值為2.502。在27h時(shí)，M8生長(zhǎng)緩慢，其OD<,600nm>值開始下降，確定最佳收菌期為20h。 (

5、5)將M8發(fā)酵液分別在常溫和4℃冰箱中貯存，結(jié)果表明：M8發(fā)酵液在常溫保存時(shí)，從最初的1.37×10<'9>cfu/ml降到6.79×10<'7>cfu/ml，差異極顯著(pcfu/ml，貯存12天時(shí)活菌數(shù)降為5.1l×10<'8>cfu/ml，差異極顯著(p<0.01)，因此，乳酸桿菌M8不適合以發(fā)酵液體的形式保存。 (6)本試驗(yàn)測(cè)定了15種不同保護(hù)劑組合對(duì)

6、M8在冷凍干燥中的存活率的影響。結(jié)果表明：保護(hù)劑對(duì)提高凍干過程中M8的存活率具有明顯效果，并且不同保護(hù)劑協(xié)同累加效果不同，其中18％脫脂奶粉+1％蔗糖+1％甘油+2％淀粉的活菌存活率為96.64％。 (7)Ⅲ組(添加M8凍干菌粉)與Ⅱ組(抗生素組)相比能使盲腸黏膜上乳酸菌數(shù)量顯著增加(p<0.05)，與Ⅰ組(對(duì)照組)相比差異極顯著(p<0.01)，而添加M8凍干菌粉后盲腸黏膜大腸桿菌數(shù)變化不明顯(p>0.05)；糞中乳酸菌數(shù)量以