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1、[目的] 篩選出具有一定耐酸耐膽鹽,且在體外抑制幽門螺桿菌(Helicobacterpylori,Hp)的人源乳酸桿菌,并對(duì)其進(jìn)行生化和分子生物學(xué)分析。通過給BALB/c小鼠灌服.Hp,構(gòu)建小鼠胃炎模型。研究篩選菌株對(duì)模型小鼠的治療效果,為微生態(tài)制劑的開發(fā)奠定理論和實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。 [方法] 第一部分 1、乳酸桿菌耐酸耐膽鹽能力的檢測(cè),篩選出能夠耐受胃內(nèi)環(huán)境的優(yōu)良的乳酸桿菌菌株。 2、篩選具有良好抑制或
2、殺滅幽門螺桿菌的乳酸桿菌: (1)采用打孔法篩選對(duì)幽門螺桿菌標(biāo)準(zhǔn)株SSl抑菌力強(qiáng)的乳酸桿菌菌株; (2)構(gòu)建SSI粘附胃粘膜上皮細(xì)胞SGC 7901的細(xì)胞模型,利用間接熒光抗體試驗(yàn),建立乳酸桿菌對(duì)Hp粘附SGC 7901細(xì)胞的抑制試驗(yàn),并檢測(cè)乳酸菌活菌和滅活菌對(duì)SSl粘附能力的抑制作用。 3、應(yīng)用API 50CHL乳酸菌系統(tǒng)生化鑒定卡和基于16SrRNA的分子生物學(xué)方法對(duì)所篩選的菌株進(jìn)行分析。 第二部
3、分 1、小鼠灌服SSl活菌,構(gòu)建小鼠Hp胃炎模型。 2、用乳酸桿菌干預(yù)模型小鼠,測(cè)定其治療效果: (1)胃粘膜組織中的Hp的培養(yǎng)鑒定; (2)間接ELISA法檢測(cè)血清Hp抗體; (3)胃組織切片染色鏡檢,評(píng)價(jià)炎癥情況; (4)檢測(cè)淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化和NK細(xì)胞活性的情況,評(píng)價(jià)乳酸桿菌對(duì)模型小鼠免疫功能的影響; (5)利用熒光定量PCR檢測(cè)乳酸桿菌對(duì)Hp的根除效果。 [結(jié)果]
4、 第一部分 l、篩選出具有良好耐酸耐膽鹽的四株乳酸桿菌:Lac12、Lac15、Lac22、Lac31: 2、篩選出具有良好抑制幽門螺桿菌,并進(jìn)行體內(nèi)實(shí)驗(yàn)的三株乳酸桿菌:Lac 15、Lac22、Lac31: 3、API 50CHL乳酸菌系統(tǒng)生化鑒定卡鑒定:Lac15為唾液乳桿菌,Lac22、Lac31、Lac12為植物乳桿菌。 4、16SrRNA分析:上述四株乳酸桿菌符合生化鑒定結(jié)果。 第二
5、部分 1、BALB/c小鼠Hp胃炎模型構(gòu)建成功; 2、胃粘膜組織中未培養(yǎng)出Hp; 3、尿素酶實(shí)驗(yàn)顯示,三株乳酸桿菌抑制或根除Hp的成功率為:Lac15為70%,Lac22為50%,Lac3l為50%; 4、Lac15能夠顯著性地降低血清中Hp的抗體水平(P<0.05),Lac22、Lac31也能夠降低血清中Hp的抗體水平,但是沒有顯示出統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05); 5、Lac15能夠很好的刺激淋巴
6、細(xì)胞轉(zhuǎn)化,與正常對(duì)照組相比有顯著性差異 (P<0.05)。三株菌對(duì)NK細(xì)胞活性均未表現(xiàn)出增強(qiáng)作用(P>0.05); 6、經(jīng)Lac15治療,胃粘膜組織的炎癥反應(yīng)表現(xiàn)為輕度炎癥,經(jīng)Lac22、Lac31治療,則表現(xiàn)為中度炎癥; 7、熒光定量PCR檢測(cè)結(jié)果表明,Lac15、Lac22和Lac31對(duì)SSl有效的根除率分別為:20%、0、10%,低于用尿素酶測(cè)定的結(jié)果。 [結(jié)論] 1、篩選出l株唾液乳桿菌和3株植
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