甘肅地區(qū)葡萄酒相關(guān)酵母菌的分離及其分類(lèi)鑒定.pdf

1、葡萄酒釀造是一個(gè)復(fù)雜的微生物學(xué)過(guò)程，其中由酵母菌主導(dǎo)的酒精發(fā)酵是葡萄酒生產(chǎn)的重要階段之一。酵母菌的生物多樣性及微生物群體組成對(duì)葡萄酒的感觀質(zhì)量具有重要影響。葡萄酒相關(guān)酵母菌的生物多樣性及分類(lèi)鑒定是選育優(yōu)良釀酒酵母菌種的基礎(chǔ)和關(guān)鍵。 而我國(guó)葡萄釀酒微生物的生物多樣性研究尚未開(kāi)始，葡萄酒相關(guān)酵母菌資源也被長(zhǎng)期擱置。我國(guó)甘肅武威和高臺(tái)葡萄產(chǎn)區(qū)屬冷溫帶干旱區(qū)，正成為有競(jìng)爭(zhēng)力的優(yōu)質(zhì)葡萄酒產(chǎn)區(qū)，同時(shí)也是未開(kāi)啟的葡萄酒相關(guān)酵母菌資源庫(kù)。本研究

2、以莫高葡萄酒廠和祁連葡萄酒廠設(shè)備表面、葡萄生產(chǎn)基地的葡萄漿果表面、土壤等為分離源分離葡萄酒相關(guān)酵母菌。使用WL營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基的形態(tài)分類(lèi)、經(jīng)典分類(lèi)學(xué)方法、26S rDNA-RFLP分析、26S rDNAD1/D2區(qū)及5.8S-ITS區(qū)序列分析，對(duì)所分離的酵母菌進(jìn)行分類(lèi)鑒定，揭示此地區(qū)的葡萄酒相關(guān)酵母菌的生物多樣性。 一、利用WL營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基進(jìn)行聚類(lèi)分析，將采集于莫高酒廠的234株葡萄酒相關(guān)酵母菌分為10個(gè)培養(yǎng)類(lèi)型，將采集于祁連酒廠的酵母

3、菌株166株分為7個(gè)培養(yǎng)類(lèi)型，這說(shuō)明兩地的酵母菌種類(lèi)有較大的差異。 二、采用26S rDNA D1/D2區(qū)序列分析和5.8S-ITS區(qū)序列分析，結(jié)果表明莫高酒廠的葡萄酒相關(guān)酵母菌分屬于Metsehnikowua pulcherrima(美極梅奇酵母)、Hanseniaspora uvarum(葡萄有孢漢遜酵母)、Issatchenkia orientalis(東方伊薩酵母)、Pichia fermentans(發(fā)酵型畢赤酵母)、

4、Pichia kluyveri var．kluweri(克魯維畢赤酵母)、Saccharomyces cereyisiae(釀酒酵母)、Cryptococcus magnus(大隱球酵母)、Cryptococcus uzbeldstanensis、 Rhodosporidium kratochvilovae(紅冬孢酵母屬)、Rhodotorula mucilaginosa等10個(gè)種；祁連酒廠的葡萄酒相關(guān)酵母菌分別為Saccharomyc

5、es cerevisiae(釀酒酵母)、Issatchenkia orientalis(東方伊薩酵母)、Pichia anomala、Rhodotorula mucilagrinosa(膠紅酵母)、 Cryptococcus magnus(大隱球酵母)、Cryptococcus flavescens(淺黃隱球酵母)、 Hanseniaspora uvarum(葡萄汁有孢漢遜酵母)等7個(gè)種。 三、莫高酒廠葡萄園土壤中的優(yōu)勢(shì)菌種為C

6、．magnus和R．mucilaginosa，設(shè)備表面以紅酵母和H．uvarum為優(yōu)勢(shì)菌種。祁連酒廠葡萄漿果表面的優(yōu)勢(shì)菌種為H. uvarum和 I．orientalis 。 四、莫高葡萄酒廠在所調(diào)查的4個(gè)自然發(fā)酵過(guò)程中，其菌群變化如下：自然發(fā)酵初期的葡萄酒相關(guān)酵母菌主要有M．pulcherrima、H．uvarum、Pichia kluveri var．kluvveri、I.orientalis，其中H.uvarum為啟動(dòng)發(fā)酵

7、的主要菌種。自然發(fā)酵中期時(shí)H．uvarum比例較初期有所下降甚至不存在，而M．pulcherrima較初期有所增長(zhǎng)，同時(shí)S．cerevisiae也開(kāi)始生長(zhǎng)。此后S．cerevisiae為發(fā)酵的主要?jiǎng)恿?，主?dǎo)發(fā)酵直至結(jié)束。 五、26S rDNA D1/D2區(qū)序列分析表明菌株C248-K與Pichia fermentans的同源性為98.8％，存在7個(gè)堿基的差異，菌株C84與Metschnikowia pulcherrima的同源性