絕經(jīng)后婦女性激素環(huán)境的改變與胰島素抵抗.pdf

1、胰島素抵抗(insulin resistance)是指胰島素在外周組織攝取和利用葡萄糖的能力下降的一種狀態(tài)。作為心血管疾病、糖尿病、代謝綜合征的發(fā)病基礎(chǔ)，胰島素抵抗發(fā)生率在絕經(jīng)后升高嚴(yán)重威脅著老年女性健康。近年來的研究發(fā)現(xiàn)，絕經(jīng)后性激素環(huán)境的變化可能與胰島素抵抗有關(guān)，但其機制尚未完全明確。絕經(jīng)后性激素環(huán)境的最大變化是卵巢功能逐漸衰退進而E2水平下降，腎上腺來源的脫氫表雄酮/硫酸脫氫表雄酮(DHEA/DHEA-S)在外周組織的轉(zhuǎn)化逐漸成為

2、性激素的主要來源。在這個變化的過程中，調(diào)控性激素的關(guān)鍵蛋白性激素結(jié)合球蛋白(SHBG)、游離雄激素、DHEA/DHEA-S及其在外周組織的轉(zhuǎn)化可能參與了絕經(jīng)后胰島素抵抗的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。
　　 本課題從人群研究、動物實驗、細胞實驗三個水平探討了絕經(jīng)后性激素環(huán)境的變化與胰島素抵抗的關(guān)系，研究絕經(jīng)后性激素環(huán)境的變化是否通過影響體脂、血脂、胰島素抵抗相關(guān)細胞因子介導(dǎo)胰島素抵抗，分析在絕經(jīng)后早期婦女中應(yīng)用激素替代療法能否改善胰島素抵抗，并進一

3、步研究性激素受體表達的變化、DHEA/DHEA-S的外周轉(zhuǎn)化是否與絕經(jīng)后胰島素抵抗有關(guān)。
　　 第一部分絕經(jīng)后婦女性激素環(huán)境的改變與胰島素抵抗
　　 目的：研究絕經(jīng)后早期、晚期性激素環(huán)境的不同與胰島素抵抗之間的關(guān)系以及其是否能通過影響體脂、血脂增加胰島素抵抗的風(fēng)險，研究在絕經(jīng)后早期婦女中應(yīng)用HRT能否通過改善體脂、血脂進而改善胰島素抵抗。
　　 方法：募集絕經(jīng)后早期婦女(絕經(jīng)時間≤5年)105名、絕經(jīng)后晚期婦女(

4、絕經(jīng)時間≥10年)107名，并進一步根據(jù)體重指數(shù)(BMI)分為正常體重組(BMI＜24kg/m2)、超重肥胖組(BMI≥24kg/m2)。采用雙能X線吸收法(DEXA)測定體脂分布情況，抽取空腹血檢測SHBG、T、E2、DHEA-S、Glu、Ins、TC、TG、HDL-c、LDL-c、apoA、apoB水平并計算游離睪酮指數(shù)(FAI)和穩(wěn)態(tài)模型胰島素抵抗指數(shù)(HOMA-IR)，采用偏相關(guān)分析、多元線性回歸分析、單因素方差分析等統(tǒng)計方法分

5、析SHBG、FAI、E2、T、DHEA-S與體脂分布、血脂、胰島素抵抗的關(guān)系。募集25名絕經(jīng)后早期婦女(絕經(jīng)時間≤5年)并用戊酸雌二醇(補佳樂)+孕激素(琪寧)周期序貫HRT進行干預(yù)一年，每三月隨訪一次，測定治療前后體脂、血脂、性激素水平、胰島素、血糖，采用配對t檢驗分析HRT對體脂、血脂、胰島素抵抗的影響。
　　 結(jié)果：絕經(jīng)后晚期婦女比絕經(jīng)后早期婦女脂肪含量、TG、Ins、HOMA-IR更高，DHEA-S、E2、apoA/ap

6、oB水平更低(p＜0.05)。無論是絕經(jīng)后早期婦女還是絕經(jīng)后晚期婦女，超重肥胖組比正常體重組T/L、男性脂肪比例、HOMA-IR、Ins更高而女性脂肪比例、apoA/apoB更低(p＜0.05)，而血脂其它指標(biāo)無顯著差異(p＞0.05)。在絕經(jīng)后早期婦女中，超重肥胖組比正常體重組SHBG更低而FAI更高(p＜0.05)。在絕經(jīng)后晚期婦女中，超重肥胖組比正常體重DHEA-S、E2更高(p＜0.05)。偏相關(guān)分析和多元線性回歸分析表明：在絕

7、經(jīng)后早期婦女中，F(xiàn)AI與腹部脂肪堆積成正相關(guān)，SHBG與apoA/apoB成正相關(guān)，SHBG與Ins、HOMA-IR成負相關(guān)，DHEA-S與Glu成正相關(guān)(p＜0.05)；在絕經(jīng)后晚期婦女中，DHEA-S與腹部脂肪堆積成正相關(guān)而與apoA成負相關(guān)，F(xiàn)AI與Glu成正相關(guān)(p＜0.05)。經(jīng)過HRT治療一年后，生活質(zhì)量明顯改善，T/L、男性脂肪比例、HOMA-IR明顯下降(p＜0.05)，而女性脂肪比例明顯上升(p＜0.05)，血脂各項指

8、標(biāo)之間無顯著差異(p＞0.05)。
　　 結(jié)論：絕經(jīng)后雄激素活性升高與胰島素抵抗風(fēng)險增加有關(guān)，這種相關(guān)性在絕經(jīng)后不同階段表現(xiàn)有所不同，主要體現(xiàn)在：低水平SHBG引起的FAI升高、卵巢功能逐漸喪失引起的肥胖婦女體內(nèi)代償性DHEA-S升高，而且低SHBG、高FAI與DHEA-S能導(dǎo)致腹部脂肪堆積、apoA下降并進一步影響胰島素抵抗。絕經(jīng)后早期婦女進行HRT能顯著改善體脂分布和HOMA-IR。
　　 第二部分戊酸雌二醇對去勢大

9、鼠胰島素抵抗的影響及相關(guān)核受體機制
　　 目的：研究戊酸雌二醇(補佳樂)對去勢大鼠性激素水平、體脂、血脂、細胞因子、胰島素抵抗的影響，進一步探討戊酸雌二醇(補佳樂)對去勢大鼠肝臟組織中SHBG、PPAR7、性激素受體(AR、ERα、ERβ)及DHEA外周轉(zhuǎn)化所需的酶(17β-HSD、芳香化酶)表達的影響。
　　 方法：27只雌性SD大鼠分為三組：假手術(shù)組(SHAM，n=10)、去勢組(OVX，n=8)、去勢+補佳樂組(O

10、VX+E2，n=9)。雙卵巢切除后OVX+E2組用補佳樂灌胃(800μg/kg·d)，SHAM和OVX組蒸餾水灌胃，每兩周稱重一次，12周后處死動物。腹主動脈抽血檢測SHBG、T、E2、DHEA、Glu、Ins、TC、TG、HDL-c、LDL-c、TNF-α、IL-6、脂聯(lián)素、瘦素水平，摘取內(nèi)臟脂肪并計算內(nèi)臟脂肪系數(shù)，摘取肝臟組織切片進行HE染色，用Western blot、Real-time PCR檢測肝臟組織中SHBG、PPART、

11、AR、ERα、ERβ、17β-HSD、芳香化酶的表達。
　　 結(jié)果：與SHAM組相比，OVX組動物E2、SHBG明顯下降，F(xiàn)AI、DHEA、體重、VFM、IL-6、HOMA-IR明顯上升(p＜0.05)，肝臟組織中脂肪堆積明顯增多；OVX+E2組與OVX組動物相比，E2、SHBG、HDL-c明顯上升，F(xiàn)AI、體重、VFM、LDL-c、IL-6、HOMA-IR明顯下降(p＜0.05)，肝臟組織中脂肪堆積明顯減少。與此同時，OVX組

12、比SHAM組PPARγ、AR、17β-HSD、芳香化酶的表達明顯升高，而SHBG、ERα的表達明顯下降(p＜0.05)；采用補佳樂干預(yù)后，這種趨勢呈現(xiàn)一定程度的逆轉(zhuǎn)(p＜0.05)。
　　 結(jié)論：在動物實驗中，補佳樂能逆轉(zhuǎn)由于手術(shù)絕經(jīng)導(dǎo)致的內(nèi)臟脂肪堆積、IL-6及HOMA-IR升高(這些變化與E2和SHBG下降、FAI升高、DHEA代償性升高有關(guān))。絕經(jīng)后胰島素抵抗風(fēng)險增加可能與肝臟組織中PPARγ、AR、DHEA外周轉(zhuǎn)化升高以

13、及SHBG、ERα表達下降有關(guān)。
　　 第三部分HepG2細胞中胰島素抵抗?fàn)顟B(tài)下SHBG的表達及DHEA外周轉(zhuǎn)化對胰島素受體信號通路的影響
　　 目的：研究胰島素抵抗模型下SHBG表達的變化，不同濃度DHEA及其外周轉(zhuǎn)化對胰島素受體信號通路中的關(guān)鍵分子(IR、IRS-2、GLUT-2)表達的影響。
　　 方法：采用高胰島素誘導(dǎo)方法建立胰島素抵抗HepG2細胞模型，并檢測胰島素抵抗?fàn)顟B(tài)下SHBG的表達；用E2、T、

14、不同濃度DHEA作用于HepG2細胞72h，檢測IR、IRS-2、GLUT-2的表達；采用來曲唑(letrizole)、曲洛司坦(trilostane)阻斷DHEA外周轉(zhuǎn)化后，檢測IR、IRS-2、GLUT-2的表達。
　　 結(jié)果：濃度為10-6M胰島素作用于HepG2細胞36h后，細胞達到最大胰島素抵抗?fàn)顟B(tài)，與此同時SHBG蛋白及mRNA表達最低(p＜0.05)。高濃度(10-5M)DHEA的作用和T類似，明顯下調(diào)IR、IRS

15、-2、GLUT-2蛋白與mRNA表達；隨著濃度的降低，DHEA的下調(diào)作用減弱；10-9M濃度的DHEA作用于細胞后IRS-2、GLUT-2蛋白與mRNA表達較空白對照組上升(類似于E2)；和空白對照組相比，E2明顯上調(diào)IR、IRS-2、GLUT-2蛋白與mRNA表達(p＜0.05)。與單獨DHEA作用相比，Letrizole阻斷后IR、IRS-2、GLUT-2蛋白和mRNA表達明顯下調(diào)；與DHEA+Letrizole作用相比，Trilo