促產(chǎn)蛋核酸制劑的改造及對(duì)其安全性初步評(píng)價(jià).pdf

1、核酸制劑作為一種新興的生物制品，在感染性疾病、遺傳病和腫瘤等疾病的預(yù)防和治療以及促進(jìn)動(dòng)物生長繁殖方面具有很大潛力。根據(jù)國際規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)，核酸制劑大規(guī)模生產(chǎn)使用以前首先需要對(duì)其進(jìn)行嚴(yán)格的安全性評(píng)價(jià)。其中制劑與宿主染色體DNA是否會(huì)發(fā)生整合成為一個(gè)公眾和研究者最為關(guān)注的問題。
　　本實(shí)驗(yàn)室在早期的研究工作中開發(fā)了一種可以有效改善絲毛烏骨雞產(chǎn)蛋性能的核酸制劑，我們應(yīng)用Qiagen公司生產(chǎn)的質(zhì)粒中提試劑盒大量制備注射用核酸制劑，通過建立一整

2、套安全性評(píng)價(jià)方案，并按照方案設(shè)計(jì)的周期采樣，通過試劑盒提取注射過該核酸制劑的洛島紅雞的各個(gè)相關(guān)組織的基因組，包括肌肉（注射組織）、腸道、卵巢、肝臟、胃、心臟、輸卵管、脾臟、腎臟等九個(gè)組織，每次采樣三只雞即三個(gè)重復(fù)，采樣時(shí)間分別為0天、3天、7天，以后每隔一周定期采樣。并設(shè)計(jì)相應(yīng)引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，檢測(cè)核酸制劑在不同組織中持續(xù)存在的時(shí)間。對(duì)該制劑的安全性進(jìn)行的初步分析表明該制劑在洛島紅蛋雞體內(nèi)最長有效發(fā)揮作用的時(shí)間大約為21天。顯然時(shí)間較

3、短，為此，本研究在原制劑的基礎(chǔ)上對(duì)其進(jìn)行改造，添加了SV40大T抗原表達(dá)結(jié)構(gòu)和SV40復(fù)制起始位點(diǎn)，通過這一改造使其有效發(fā)揮作用的時(shí)間延長到了49天，這大大延長了其有效發(fā)揮作用的時(shí)間。
　　與此同時(shí)，本研究還通過PCR檢測(cè)的方法對(duì)該制劑在不同組織中分布及持續(xù)存在時(shí)間進(jìn)行的了檢測(cè)，初步對(duì)其安全性進(jìn)行了分析得到如下結(jié)果:在肌肉組織中該核酸制劑可持續(xù)存在到49天，56天時(shí)已完全檢測(cè)不到;對(duì)于有食用價(jià)值的雞心、雞肝、雞胃等器官組織在注射后

4、第三天時(shí)可以檢測(cè)到微量存在，在第七天時(shí)已完全檢測(cè)不到，說明這些組織在7天后均安全可食用;而對(duì)于繁殖器官輸卵管和卵巢，則在實(shí)驗(yàn)第零天即檢測(cè)不到其存在，可以推測(cè)雞蛋是始終可以食用的。當(dāng)然這些只是對(duì)該制劑的安全性進(jìn)行的初步評(píng)價(jià)，在其大規(guī)模使用之前還需進(jìn)行更為深入的安全性評(píng)價(jià)。
　　總之，本項(xiàng)目開發(fā)的促產(chǎn)蛋核酸制劑，雖然還有許多的工作有待進(jìn)一步開展，但具有良好的開發(fā)潛力，因此建議進(jìn)一步增加投入開展深入細(xì)致的研究工作，為該產(chǎn)品早日上市并服務(wù)