模擬微重力效應(yīng)對(duì)MAD2沉默后人骨肉瘤細(xì)胞增殖的影響.pdf

1、MAD2是一種紡錘體組裝檢驗(yàn)點(diǎn)蛋白，其功能是檢測(cè)染色體動(dòng)粒與紡錘體微管的連接進(jìn)而控制有絲分裂的運(yùn)行。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)在模擬微重力條件下培養(yǎng)的人骨肉瘤細(xì)胞中MAD2升高、紡錘體多極率上升、細(xì)胞周期發(fā)生阻滯。
　　為了進(jìn)一步研究MAD2的功能，本課題應(yīng)用RNAi技術(shù)特異性沉默MAD2表達(dá)。首先，利用構(gòu)建的四種pSilencer4.1-MAD2-shRNA真核表達(dá)重組體轉(zhuǎn)染人骨肉瘤細(xì)胞系MG-63和U-2 OS。Western bl

2、ot檢測(cè)MAD2的表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染MAD2-shRNA-1和MAD2-shRNA-3重組體的細(xì)胞具有明顯的沉默效果。觀察地基條件下MAD2沉默后細(xì)胞增殖的改變，細(xì)胞生長(zhǎng)曲線的測(cè)定結(jié)果表明，與對(duì)照組相比MAD2沉默后，人骨肉瘤細(xì)胞系MG-63和U-2 OS細(xì)胞生長(zhǎng)均受到抑制。此外，利用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期變化情況，結(jié)果顯示與對(duì)照組相比 MAD2沉默后，U-2 OS中G2/M期的細(xì)胞比例明顯減少，S期的細(xì)胞比例增加，而MG-63的細(xì)胞周

3、期無(wú)明顯變化。同時(shí)DNA含量分析結(jié)果表明在MAD2沉默的U-2OS中多倍體細(xì)胞發(fā)生率明顯降低，而MG-63中多倍體細(xì)胞發(fā)生率并無(wú)明顯變化。
　　在此基礎(chǔ)上，為了探討模擬微重力效應(yīng)對(duì)MAD2沉默后細(xì)胞增殖的影響，將封閉MAD2效果最好的重組體MAD2-shRNA1轉(zhuǎn)染MG-63和U-2OS細(xì)胞，利用回轉(zhuǎn)儀模擬微重力效應(yīng)培養(yǎng)24h、48h和72h后，分析細(xì)胞周期和多倍體細(xì)胞發(fā)生率的變化情況。結(jié)果表明隨著模擬微重力培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，MG-