模擬微重力效應對BUB1-MAD2沉默后人骨肉瘤細胞CIN的影響.pdf

1、染色體不穩(wěn)定性(Chromosomal Instability,CIN)具體表現為染色體數目的改變和染色體結構的改變。課題組前期的研究中發(fā)現,隨著人骨肉瘤細胞(U-2OS)在模擬微重力環(huán)境中生長時間逐漸延長,U-2OS細胞多極紡錘體發(fā)生率逐漸升高且細胞周期被阻滯在G2/M期,BUB1蛋白與MAD2蛋白的表達量也隨之升高。為了進一步研究模擬微重力效應對U-2OS細胞染色體不穩(wěn)定性影響的分子機制,本課題首先利用RNA干擾技術以pSilenc

2、er4.1-CMVneo為載體構建出2個pSilencer4.1-CMVneoBUB1siRNA重組體。隨后,將此重組體和課題組前期構建的pSilencer4.1-CMVneoMAD2siRNA重組體以及作為對照的亂序重組體分別轉染入U-2OS細胞中篩選出對照組U-2OS細胞單克隆3個,U-2OSBUB1RNAi細胞單克隆4個,U-2OSMAD2RNAi細胞單克隆7個用于后續(xù)驗當中。最后,將細胞置于模擬微重力系統(tǒng)中分別培養(yǎng)24小時、48

3、小時和72小時后,對其多極紡錘體發(fā)生率、細胞周期以及DNA含量進行分析。
　　研究結果表明,隨著對照組U-2OS細胞在模擬微重力系統(tǒng)中培養(yǎng)時間的延長,其多極紡錘體發(fā)生率逐漸升高,而在相同環(huán)境中生長的BUB1/MAD2沉默后的U-2OS細胞,其多極紡錘體發(fā)生率逐漸下降。并且模擬微重力效應仍可將BUB1或MAD2蛋白被沉默后的U-2OS細胞阻滯在G2/M期,但是阻滯效果隨模擬微重力時間的延長而降低。另外隨著模擬微重力效應對BUB1或M