蘿卜游離小孢子胚狀體誘導(dǎo)與植株再生研究.pdf

1、為了建立高效的蘿卜游離小孢子培養(yǎng)體系，加速育種材料純化，以19個(gè)材料為試材，采用游離小孢子培養(yǎng)方法，研究影響小孢子胚誘導(dǎo)因素，促進(jìn)小孢子植株再生的方法，探討了小孢子植株倍性鑒定方法，對(duì)獲得的再生植株的性狀進(jìn)行了鑒定，獲得了下列試驗(yàn)結(jié)果： 1、不同基因型的蘿卜試材間的小孢子胚狀體發(fā)生能力有很大的差異，19個(gè)蘿卜品種中有13個(gè)品種產(chǎn)生了胚狀體，其余6個(gè)品種沒(méi)有被誘導(dǎo)成功。小孢子胚狀體誘導(dǎo)率最高的品種‘Nau-11tcx-06’出胚率

2、達(dá)到10胚/蕾。 2、花蕾發(fā)育時(shí)期是小孢子誘導(dǎo)出胚狀體的關(guān)鍵因素，供試品種不同適宜培養(yǎng)的花蕾長(zhǎng)度也不相同，“花瓣/花藥”長(zhǎng)度之比為6/7～8/7時(shí)，小孢子的發(fā)育時(shí)期處于單核靠邊期與雙核早期，在形態(tài)上觀察選擇圓形小孢子占絕大多數(shù)的花蕾進(jìn)行游離小孢子培養(yǎng)較合適。 3、活性炭對(duì)小孢子的發(fā)育有很大的影響，提高胚狀體的誘導(dǎo)率，并且提高子葉型胚狀體的比例，低濃度的活性炭對(duì)小孢子發(fā)育的誘導(dǎo)起促進(jìn)作用，高濃度反而起到一定的抑制作用。

3、 4、外源激素對(duì)小孢子發(fā)生及發(fā)育有一定的影響，低濃度的6-BA促進(jìn)難成胚的基因型細(xì)胞啟動(dòng)分裂，高濃度的6-BA對(duì)小孢子胚狀體的產(chǎn)生有抑制作用，并使小孢子胚狀體向畸形化發(fā)展。 5、將花蕾保存在4℃低溫環(huán)境中預(yù)處理，胚狀體統(tǒng)計(jì)結(jié)果表明，胚狀體誘導(dǎo)率未有顯著變化，但是可以暫時(shí)保存材料，并不降低培養(yǎng)效果。經(jīng)過(guò)5～6天的保存，發(fā)現(xiàn)誘導(dǎo)率明顯降低，經(jīng)染色檢測(cè)花粉活力明顯不足。 6、游離小孢子33℃高溫預(yù)處理，可以改變小孢子發(fā)育方

4、向，使其由配子體發(fā)育途徑轉(zhuǎn)向孢子體發(fā)育途徑，并使小孢子維持較高的活細(xì)胞頻率，促進(jìn)細(xì)胞分裂和胚狀體發(fā)生。 7、在對(duì)不同花期取樣誘導(dǎo)的研究中發(fā)現(xiàn)，不同的基因型適宜培養(yǎng)的花期不一致，但總體上盛花期花蕾樣品成胚率高。 8、胚狀體成苗率與胚胎發(fā)育程度密切相關(guān)，在一定范圍內(nèi)胚狀體越大越容易成苗。小孢子植株主要來(lái)源于發(fā)育健康的胚狀體，畸形胚狀體很難在固體培養(yǎng)基上生長(zhǎng)發(fā)育。 9、試管苗生根培養(yǎng)基經(jīng)過(guò)比較，發(fā)現(xiàn)以MS+NAA0.2

5、mg·L<'-1>+3％蔗糖+0.7％瓊脂最為適宜，生長(zhǎng)的根系粗壯整齊，如果一次生根不成功，還需要二次生根。在溫度、濕度和光照條件適宜的情況下，小孢子植株的移栽成活率可以達(dá)到90％-100％。 10、不同基因型材料的小孢子植株群體中單倍體、二倍體、四倍體和嵌合體所占的比例不同，不同品種間植株的自然加倍率有顯著的差異。 11、小孢子植株倍性鑒定的最可靠方法是細(xì)胞學(xué)方法，可以通過(guò)根尖細(xì)胞壓片或花粉母細(xì)胞壓片的方法進(jìn)行植株倍性