紅菜薹游離小孢子培養(yǎng)和植株再生技術(shù)研究.pdf

1、本文以12個(gè)基因型的紅菜薹品種或品系為試材，采用游離小孢子培養(yǎng)的方法，探討了影響小孢子胚誘導(dǎo)的因素、促進(jìn)小孢子植株再生的方法，以及小孢子植株的倍性鑒定方法，獲得了下列結(jié)果： 1．基因型、花蕾大小對(duì)胚狀體誘導(dǎo)的影響 不同基因型材料的胚胎發(fā)生能力有很大差異。在12個(gè)供試材料中，有9個(gè)材料獲得了胚狀體，占供試材料的75％。其中b和D二個(gè)材料胚誘導(dǎo)率較高，b的產(chǎn)胚率達(dá)到4.52個(gè)／蕾，單皿最高產(chǎn)胚量達(dá)到63個(gè)。出胚材料中，最低的

2、產(chǎn)胚率僅為0.02個(gè)胚／蕾。 紅菜薹花蕾大小與小孢子發(fā)育時(shí)期的關(guān)系：染色觀察表明，當(dāng)花蕾長(zhǎng)為2.50～3.50mm時(shí)，小孢子產(chǎn)胚率較高，達(dá)到4.40個(gè)／蕾，適合進(jìn)行游離小孢子培養(yǎng)，此時(shí)花瓣與花藥長(zhǎng)度之比為3／4～1／1。采用<2.00mm和>4.00mm的蕾培養(yǎng)則沒有得到胚狀體。 2．不同培養(yǎng)條件對(duì)胚狀體誘導(dǎo)的影響 4℃低溫預(yù)處理花蕾對(duì)紅菜薹胚胎發(fā)生有負(fù)作用，隨低溫處理時(shí)間的延長(zhǎng)，產(chǎn)胚量逐漸下降。處理1d產(chǎn)量有所

3、下降，但下降不顯著，每30蕾產(chǎn)胚量比對(duì)照69個(gè)少了11個(gè)。處理2d的每30蕾產(chǎn)胚量下降到21個(gè)，差異顯著。采用新鮮的或低溫處理不超過(guò)1天的花蕾培養(yǎng)效果較好。 培養(yǎng)基中添加0.5g／L活性炭對(duì)不同基因型胚狀體的誘導(dǎo)效率提高程度不同，但均表現(xiàn)促進(jìn)作用。材料X增加最為顯著，每30個(gè)蕾的產(chǎn)胚量由18個(gè)提高到34個(gè)，增加了88.89％。同時(shí)添加活性炭后，出胚時(shí)間提前，子葉型胚數(shù)明顯增加，心型胚和魚雷胚比例明顯提高。 培養(yǎng)基中添加6

4、-BA對(duì)紅菜薹小孢子胚狀體誘導(dǎo)有促進(jìn)作用，適宜添加濃度為0.2mg／L，過(guò)高則起抑制作用，6-BA濃度為0.2mg／L時(shí)，材料b的誘導(dǎo)率達(dá)到最高值，每30個(gè)蕾的胚產(chǎn)量由135提高到174個(gè)，為CK的129％，與對(duì)照差異極顯著。添加NAA對(duì)胚狀體誘導(dǎo)有一定的抑制作用。 3．不同培養(yǎng)基對(duì)小孢子植株再生的影響 培養(yǎng)基的水分狀況直接影響小孢子胚的直接分化成苗能力及成苗方式。子葉型胚在15g／L瓊脂的培養(yǎng)基上直接成苗率最高，達(dá)56

5、.67％。而瓊脂濃度為9g／L時(shí)，胚狀體直接成苗率僅為11.67％，多褐化死亡。 本實(shí)驗(yàn)研究了小孢子植株在培養(yǎng)基MS+NAA（0.2mg／L）、MS+NAA（0.5mg／L）、1／2MS、1／2MS+IBA（0.5mg／L）、1／2MS+IAA（0.2mg／L）上的生根情況。結(jié)果表明，再生植株在1／2MS+IBA（0.5mg／L）上生根效果好、在1／2MS上生根效果其次；生根能力同基因型有關(guān)，如株系D-1各種培養(yǎng)均能生根、生根率