小菘菜游離小孢子培養(yǎng)技術(shù)的優(yōu)化.pdf

1、小菘菜[Brassica campestris L.ssp.chinensis(L.) Makino var.communis Tsen etLee]是十字花科(Cruciferae)蕓薹屬蕓薹種不結(jié)球白菜亞種的一個變種。由于小菘菜為異花授粉植物，用常規(guī)方法進行田間育種，一般需要6～8代才能選育出理想的材料。但通過游離小孢子培養(yǎng)(Isolated Microspore Culture，IMC)這一技術(shù)不僅可以快速獲得純合的育種材料系統(tǒng)，

2、縮短育種年限，提高育種效率，而且對新品種的選育和種質(zhì)資源的開發(fā)起到非常大的作用。
　　 目前我國游離小孢子培養(yǎng)雖已取得了較大的進展，但是小孢子基因型間產(chǎn)胚率差異大及植株再生率低仍然是實際應(yīng)用中的一大難題。本論文通過對選取的9份不同基因型的小菘菜為試材，對影響小孢子出胚率和植株再生率的因素以及小孢子再生植株染色體倍性的鑒定進行了研究，旨在建立高頻穩(wěn)定的小菘菜小孢子培養(yǎng)體系。主要研究結(jié)果如下:
　　 1.在影響小菘菜游離小孢

3、子胚胎誘導(dǎo)率的因素方面:
　　 (1)基因型對小菘菜小孢子的胚胎發(fā)生能力起著決定性的作用;
　　 (2)不同基因型材料最適的花蕾長度有著一定的差異，小菘菜的花蕾長度在2.00～2.99 mm時，小孢子單核靠邊期的比例最大，獲得的胚狀體最多;
　　 (3)小菘菜游離小孢子培養(yǎng)最適的取材時期是在盛花期，初花期和末花期的小孢子胚胎誘導(dǎo)率低;
　　 (4)小菘菜最適的溫度預(yù)處理組合為4℃低溫處理1d+33℃高溫?zé)?/p>

4、激處理1d。
　　 (5)不同的基因型對植物生長調(diào)節(jié)劑的反應(yīng)不同。對于易出胚材料NHCC秋-633而言，在不添加任何激素的培養(yǎng)基中胚胎發(fā)生率最高;在1/2NLN培養(yǎng)基中添加0.05 mg·L-16-BA和0.2 mg·L-1 NAA可以促進不能出胚的材料出胚。對于中出胚和難出胚的基因型，添加0.05 mg·L-16-BA和0.1mg·L-1 NAA胚胎誘導(dǎo)率最高。
　　 (6)前期用17％的高糖培養(yǎng)基處理小孢子1d后更換

5、新鮮的13％的蔗糖培養(yǎng)基對小孢子的出胚率有促進作用。
　　 (7)用0.8mg·L-1的秋水仙堿處理小孢子1d后更換新鮮的1/2NLN培養(yǎng)基可顯著提高小孢子的胚胎發(fā)生率。
　　 (8)在小孢子提取培養(yǎng)基中添加17％的高濃度蔗糖或8％的甘露醇可以提高小孢子的出胚率。
　　 2.在影響游離小孢子胚狀體再生植株因素方面:
　　 (1)1.2％瓊脂濃度的B5固體培養(yǎng)基最適合小孢子胚狀體的萌發(fā)和植株再生。
　

6、　 (2)子葉型胚在液體培養(yǎng)基中滯留時間越長，胚的成苗率越低，再生植株的玻璃化程度也越高。
　　 (3)培養(yǎng)基中添加3.0～4.0 mg·L-1的AgNO3可以顯著提高小孢子胚芽誘導(dǎo)率和平均出芽數(shù)，但AgNO3的濃度過高對胚芽的再生起抑制作用。
　　 3.在小菘菜小孢子再生植株的倍性鑒定方面:
　　 (1)小菘菜在小孢子培養(yǎng)過程中自然加倍率較高，單倍體的比率很低，僅是供體材料的10％～20％。
　　 (